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DNA的粗提取与鉴定怎么做!

中越傍串 2012-08-02
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zky914
粗提取用氯化钠溶液,在0.14mol/L时DNA溶解低,在2mol/L时溶解高,先将氯化钠溶液调到2mol/L后溶解DNA,之后加水到0.14mol/L,使得DNA分子析出,还可以将提出来的DNA分子溶于酒精,DNA分子不溶在酒精中,部分蛋白质溶解。鉴定是在DNA中加入二苯胺,如果呈现蓝色则说明DNA的存在,不能用健那绿。
10 0 2012-08-03 0条评论 回复
goolring
步骤
操作方法
原理
制备鸡血细胞液


取0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL,与新鲜的鸡血混合并搅拌,然后静置一天或离心机离心约2~3min,除去上清液
防止血液凝固,使血细胞与血浆分离
提取细胞核物质


取20mL蒸馏水与约5~10mL的鸡血细胞液混合并充分搅拌,然后用单层纱布过滤,取滤液于烧杯中
使细胞过度吸水而破裂
溶解DNA


取2mol/L的NaCl溶液40mL与上述滤液混合后,用玻璃棒沿一个方向搅拌1min
DNA在高浓度氯化钠溶液中溶解度Z大
析出DNA并滤取


沿烧杯内壁慢慢加入蒸馏水并轻轻搅拌,至白色丝状粘稠物不再增加时停止加水,然后用多层纱布过滤,取纱布上的粘稠物
DNA的溶解度随氯化钠溶液浓度的降低而降低
DNA的再溶解


用镊子夹取纱布上的粘稠物放入20mL浓度为2mol/L氯化钠溶液中,搅拌至完全溶解,然后用两层纱布过滤,取其滤液放入小烧杯中
DNA在高浓度氯化钠溶液中溶解度Z大
提取较纯净的DNA


取95%的、冷却的酒精50mL与滤液混合搅拌,待出现丝状物时用玻璃棒将其卷起
DNA不溶于酒精,出现沉淀

一般情况下DNA的鉴定是用甲基绿将DNA染成绿色
1 0 2012-08-07 0条评论 回复
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