pET-28（a）+质粒的提取效果不好？提取量低怎么办？

Z佳答案 回答者：匿名用户 时间:2009-08-28 去哪里找Z出色的生命科学学术交流论坛？>>> pET-28（a）+质粒的拷贝数在细菌里本身就是很低，所以和其他质粒相比量会少一些，你可以多摇一段时间，16-18h都没有问题。 略微提高抗生素的浓度，有助于提高拷贝数。还有就是不要用BL21等表达菌提质粒，表达菌多没有endA－突变，质粒的完整性和保真性都不如DH5alpha，T*P10等菌，提取的质量也不高，因为碱裂解时会有大量的多糖干扰，质和量都不如DH5α和T*P10。 铺较高抗生素浓度的板子，重新划线，挑个大点的菌落再摇。培养时候也加大抗生素浓度。