我要提人血液DNA,不知道用哪种方法Z好... 我要提人血液DNA,不知道用哪种方法Z好
血液中DNA的提取方法
(1) 将冰冻的血在室温下溶化;
(2) 取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中,加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5min,弃上清;
(3) 加入667µl STE,24µl的20%的SDS,37℃水浴1h;
(4) 加10µl的20mg/ml的蛋白酶K混匀,55℃水浴消化过夜(10~14h);
(5) 将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(6) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;再加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(7) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),旋涡振荡至充分混匀,12000rpm离心10min;
(8) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1),充分振荡混匀,12000rpm离心10min;
(9) 将上清液转移到另一无菌2ml离心管中;加入2倍体积的冰乙醇,1/10体积醋酸钠水平摇动,直到可见絮状DNA析出;
(10) 将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15~20min,取出后再次12000rpm离心10min,使DNA沉淀;
(11) 用枪头将DNA挑到另一无菌离心管中,用适量的70%乙醇洗涤并晃动,以洗出DNA的杂质;
(12) 倒出乙醇,将DNA用真空干燥或自然晾干,加入适量的TE缓冲液回溶,-20℃保存备用。