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血样dna提取方法有哪些

553836790 2010-05-06
我要提人血液DNA,不知道用哪种方法Z好... 我要提人血液DNA,不知道用哪种方法Z好
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yuan97865
血液中DNA的提取方法
(1) 将冰冻的血在室温下溶化;
(2) 取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中,加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5min,弃上清;
(3) 加入667µl STE,24µl的20%的SDS,37℃水浴1h;
(4) 加10µl的20mg/ml的蛋白酶K混匀,55℃水浴消化过夜(10~14h);
(5) 将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(6) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;再加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(7) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),旋涡振荡至充分混匀,12000rpm离心10min;
(8) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1),充分振荡混匀,12000rpm离心10min;
(9) 将上清液转移到另一无菌2ml离心管中;加入2倍体积的冰乙醇,1/10体积醋酸钠水平摇动,直到可见絮状DNA析出;
(10) 将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15~20min,取出后再次12000rpm离心10min,使DNA沉淀;
(11) 用枪头将DNA挑到另一无菌离心管中,用适量的70%乙醇洗涤并晃动,以洗出DNA的杂质;
(12) 倒出乙醇,将DNA用真空干燥或自然晾干,加入适量的TE缓冲液回溶,-20℃保存备用。
20 0 2015-10-30 0条评论 回复
背乡弃爱
放入清水中使细胞破裂,在用差速离心法分离。
植物细胞先出去细胞壁再提取。
19 0 2010-05-07 0条评论 回复
顾天虹123
Z经典的是酚氯仿法,提取的DNA保存时间长,但是比较麻烦。
其次是Chelex-100法,DNA保存时间短,适合短期内用。
试剂盒法,省时省力,效果好,但是价格贵,老板有钱的话,推荐此法。
14 0 2010-05-07 0条评论 回复
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