Takara胶回收试剂盒 说明书，具体操作步骤

　　1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，任何类型或等级的琼脂糖都可以使用.我们强烈的建议您使用新鲜的TAE Buffer作为电泳缓冲液.不要重复使用电泳缓冲液，因为会因其PH的升高而减少产量.新鲜的TBE也可以用，但只能得到较低的产量.
　　2. 当所需DNA片段完全分离时，转移凝胶至紫外灯上，尽可能快地把所需的DNA片段切下来.
　　注:切胶时尽量把多余的凝胶切去，DNA曝露在紫外灯下不能超过30秒.
　　3. 将带有目的片段的凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中，称重得出凝胶块的重量.近似地确定其体积.假设其密度为1g/ml(几乎所有DNA凝胶的密度都可以近似为1g/ml)，于是凝胶块的体积便可通过如下方法得到:凝胶薄片的重量为0.2g， 则其体积为
　　0.2 ml.加入等体积的Binding Buffer(XP2)，于55-65℃水浴中温浴7min或至凝胶完全融化，每2-3 min振荡或涡旋混合物.
　　重要提醒:在凝胶完全溶解之后，注意凝胶-Binding buffer混和物的pH值.如果其pH值大于8的话，DNA的产量将大大减少.观察混和物的颜色，如果是橙色或红色，则要加入5 ul 浓度为5 M，pH为5.2的醋酸钠，以调低其pH值.经过这一调节，该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色.
　　4. 取一个干净的HiBind DNA Mini柱子装在一个干净的2ml收集管内(已备好).
　　5. 将第三步获得的DNA/熔胶液全部转移至柱子中.室温下10，000 x g离心1分钟.弃收集管中的滤液，将柱子套回2ml收集管内.
　　6. 如果DNA/凝胶熔液的体积超过700ul，一次只能转移700ul至柱子中，余下的可继续重复第5步至所有的溶液都经过柱子.每一个Hibind DNA回收纯化柱都有一个极限为25gDNA的吸附能力.如果预期产量较大，则把样品分别加到合适数目的柱子中.
　　7. 弃收集管中的滤液，将柱子套回2ml收集管内.移300ul Binding Buffer(XP2)至柱子中，室温下， 10，000 x g下离心1min.
　　8. 弃收集管中的滤液，将柱子套回2ml收集管内.移700ul SPW Wash buffer(已用无水乙醇稀释的)至柱子中.室温下10，000xg离心1min.
　　注意:浓缩的SPW Wash Buffer 在使用之前必须按标签的提示用乙醇稀释.如果DNA 洗涤缓冲液在使用之前是置于冰箱中的，须将其拿出置于室温下.
　　9. 重复用700ul SPW Wash buffer洗涤柱子.室温下10，000xg离心1min.
　　10. 弃收集管中的滤液，将柱子套回2ml收集管内.室温下，13，000 x g离心2 min以甩干柱子基质残余的液体.
　　11. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上，加入15~30ul(具体取决于预期的终产物浓度)的Elution Buffer(或TE缓冲液)到柱基质上，室温放置1min， 13，000xg离心1min以洗脱DNA.
　　diyi次洗脱可以洗出70-80%的结合DNA. 如果再洗脱一次的话，可以把残余的DNA洗脱出来，不过那样的浓度就会较低.