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请问怎样快速提取细菌的DNA啊?

亢夜柳 2010-07-31
也不用提的太纯,提取的DNA是用来做PCR的···一定要快速简便啊!而且要是有详细步骤的,不要试剂盒提取啊!·····谢谢了······... 也不用提的太纯,提取的DNA是用来做PCR的···一定要快速简便啊!而且要是有详细步骤的,不要试剂盒提取啊!·····谢谢了······
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辰琉偲
跟楼上那种类似

菌落或者离心下来的菌体,加点无菌水,开水煮十分钟就可以拿来当模板了。

楼上和我说的这种开水煮的方法不是每次都奏效,特别是一些革兰氏阳性菌,细胞壁太厚,高温无法破胞,或者菌体碎片对pcr影响太大,经常会有p不出来的情况。而且这种dna只能现用,不能长时间保持,-20℃条件下大概一周失效。

个人感觉成功概率不高大概10次中能p出7次吧。适合大批量pcr的时候用。

如果直接煮不行,可以先用溶菌酶处理,再开水煮。

如果还不行,那只能抽取了,我有个方法1h可以提取完,dna可以保存几年,你要是不行了,再问我。
8 0 2016-12-02 0条评论 回复
shoppingoh
直接用菌落pcr

不需提取DNA,直接用牙签挑点菌落,或取3到5微升菌液,
在pcr反应体系中先不加dna聚合酶,用沸水煮5到10分钟,加PCR聚合酶,进行反应即可。

也可以将上述所有东西加入PCR反应体系后,在设置pcr反应步骤时,在Z前面加一步,10min 95摄氏度。进行PCR反应即可。
12 0 2010-08-01 0条评论 回复
泪伊冰
可以用超声波细胞破碎仪,具体的数据,还要你自己摸索,我只是提供这个方法。
20 0 2010-08-01 0条评论 回复
iypoctnm
1. 样品收集:从培养好的LB培养基中吸取1.5ml 细菌培养液,并放到离心机中5000rpm 离心10min,弃上清;
2. 于沉淀物中加入200ul的无菌去离子水,混匀,悬浮沉淀;
3. 悬浮液在100℃沸水浴中加热10min,然后在4℃放置5min,再在离心机上12000rpm离心20min;
4. 取上清作PCR的模板备用。
5 0 2012-06-06 0条评论 回复
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