GB/T 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验.菌落总数测定

所用物品试剂：PCA平板计数琼脂：称取23.5g加1000ml分装三角瓶里，121℃灭菌20min
无菌生理盐水：氯化钠8.5g加1000ml蒸馏水121℃灭菌20min（理论上15min即可，但实际不比理论）（分析纯的氯化钠）
1ml 移液管7支 10ml一支 洗耳球一个（所用物品用前121℃灭菌20min）四支试管 试管架一个
250ml三角瓶5个 500ml三角瓶2个 量筒
75%酒精一瓶，酒精灯一盏，平皿9个（用前121℃灭菌20min）
步骤：PCA配好装250ml三角瓶，氯化钠配好装500ml三角瓶，四支试管包好，平皿包好，移液管包好，洗耳球包好，剪刀一把包好，121℃灭菌20min
同时打开超净台灭菌！灭完菌后，在超净台里进行无菌操作（操作前要注意关紫外灯避免被其灼伤），点燃酒精灯，双手酒精消毒（注意别把自己烧着了），样品用剪刀剪碎，倒入装有225ml无菌生理盐水的三角瓶中摇匀，用10ml移液管移取9ml无菌生理盐水分别至四支试管，然后再用1ml移液管移取摇好的样液至diyi支试管，摇匀，然后再用第二只移液管移取diyi支试管里的样液至第二支试管，摇匀，然后再用第三支移液管移取第二支试管里的样液至第三支试管，摇匀！（这就是梯度稀释步骤）弄好以后依次在每个试管里各用1ml移液管移取1ml摇匀样液至三个平皿里！另用1ml移液管移取1ml生理盐水至第四个平皿里！接着就把灭好的PCA培养基（50℃左右不烫手为宜）分别倒入四个平皿里，每个10ml左右，自己感觉，以上操作均在酒精灯旁完成，以上操作均为无菌操作！倒完后，放入恒温培养箱，36℃加减1°培养48h加减2h！清场！