液相色谱质谱测定时必须将样品中各物质分离吗

基本是这样。
不过也看你具体测定什么。如果你测定含量，有两个小杂质分不开也就无所谓了，因为不参与计算嘛。可是，如果你测定的是有关物质，是杂质，那么Z好是全部分开。因为分离度不够的话，峰面积没办法jing准计算，会影响杂质含量的计算的。这个在方法摸索的时候就尽可能地调整到Z佳状态。