手工法 革兰阴性菌总DNA提取模板做PCR 经验方法

质粒的方法就溶液123的方法就可以了

DNA可以参考提取动物、植物DNA的方法

更快速的方法可以参考我们做菌落pcr的方法，这个方法是采用少量的菌作为模板
然后加入pcr反应液，在pcr高温预变性的过程中菌细胞壁会裂解掉，dna和质粒都释放到溶液中作为模板参与扩增。

如果你有96孔深板（1-2ml）以及排枪Z好了，省事省时。牙签或者枪头挑菌挑一点点（只要沾到菌落就行，不要求大块，大块反而不好），96孔每孔加500ul培养液，挑96个，然后拿去摇菌，培养3-5小时，菌液就可以直接作为pcr的模板了。
只要引物好用，基本都可以扩出来的。我们鉴定阳性克隆都这样做，
你可以参考

我们实验室做批量DNA提取，一次都是144个，我们主要用的是氯酚仿法进行提取~浓度测出来都能上千，有的甚至有2000~3000，我们是用于做snpshot的，所以要求纯度还是很高的。A260/A230要求在1.8以上。判型上做四版（每版96孔样），几乎全做出来，偶尔一个两个，也无需重做（统计学意义上是足够了），所以建议使用氯酚访法提取。

如果你仅仅是为了PCR验证，而不是需要抽取基因组或者质粒的话：

1 模板在质粒上的：直接做菌液PCR，不用抽提模板。

2 模板在基因组上的：沸水煮10min，冻融一次，12000rpm 5min，去上清做PCR。

OK。