如何正确复苏冻存huvec的细胞

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1． 37℃水浴预热培养液（HUVEC-004）。
2． 从液氮中取出HUVEC的细胞管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直到管中只剩下Z后一片结晶（注意：不要让水没过产品管）。 用75%的酒精擦拭产品管外壁。
3． 将HUVEC的细胞管中的细胞移至15ml无菌离心管中，慢慢逐滴加入预温的37℃ 基础培养液（HUVEC-004B）培养液4－5ml混匀，边加边摇匀。
4． 用1ml的培养液冲洗HUVEC的细胞管，向15ml离心管中加入冲洗的细胞悬液，边滴加边摇匀。
5． 取10μl细胞悬液和10μl台盼蓝混匀后，取10μl计数。
这一步骤非常重要，能确定您收到的产品是否合格（详见如何计数复苏的细胞）
6． HUVEC的细胞悬液在1500rpm，室温条件下，离心10分钟，去除上清。
7． 加HUVEC完全培养液4－5ml， 轻轻混匀细胞，备用。
8． 接种前将 T25培养瓶中的包被液吸去，按2500－5000个细胞/cm2接种细胞。（1支冷冻的细胞可以种一瓶T25培养瓶）

9. 每个HUVEC的细胞培养瓶中加完全培养液（HUVEC-004）3-5ml， 后置于37℃、5%CO2 培养箱内培养。