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求BrdU法测细胞周期的详细步骤及资料来源,急@

丶弦月o 2010-03-06
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杨沐雨12
我觉得 EDU 和 MTT 都要简单些、速度还快,推荐
MTT:
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%
CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制

这个是EDU,http://www.bioon.com.cn/news/showarticle.asp?newsid=14929&typename=

再给你推荐个 连接,基本的生化实验都有了,可以看看 很不错http://wenku.baidu.com/view/5d29973143323968011c92da.html
12 0 2010-03-08 0条评论 回复
安静的趴着885
细胞增殖的检验方法:BrdU标记法
1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4%FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期。

2、终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。

3、弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、经固定的玻片空气干燥,0.3%H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6、5%正常兔血清封闭。

7、甲酰胺100℃,5min变性核酸。

8、冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。

9、按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
16 0 2010-03-07 0条评论 回复
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