(1)取无菌平皿,加入20ml底层培养基,凝固后作为底层。
(2)用灭菌生理盐水将短小芽胞杆菌的芽胞悬液稀释至一定浓度以能得到清晰的YJ圈,且标准品高浓度所得YJ圈直径在18~22mm为基准。用无菌吸管吸取1ml芽胞悬液,加入到200ml恒温于50℃的上层培养基中摇匀,迅速以无菌吸管吸取5ml,注入到底层培养基上,铺平待凝。
(3)在平板底部四边,分别对角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记。
(4)镊子火焰灭菌3次,然后夹取4个牛津杯垂直放置在平板中标志附近(注:勿使钢管陷入培养基内,各小杯之间尽量等距)。
(5)以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外,且四杯内液面高度相同,盖上平皿盖,静置30分钟。
(6)将平皿置于37℃恒温培养箱培养16~18 h,量取各YJ圈直径(SH、SL、UH、UL),以毫米为单位,误差不超过0.1mm。
(7)计算抗生素效价。
(8)查放线图计算抗生素效价。