仪器社区

核酸硝酸银染色浅可以重复银染吗

zwl1455930297 2017-03-23
评论
全部评论
引堪怯184
电泳,核酸需经染色才能显色带型,用核酸染色剂:1、溴化乙锭(ethidium bromide,EB)用核酸荧光染料,嵌入核酸双链配碱基间,紫外线激发,发桔红色荧光.EB-DNA复合物EB发荧光,比游离凝胶EB发荧光强度10倍,需洗净背景即清楚观察核酸带型.若EB背景太深,凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO41h或10mmol/L MgCl25min,使非结合EB褪色, 检查10ngDNA品,EB用于检测单链DNA或RNA,其单链核酸亲力相较,荧光产率相较低.凝胶或电泳缓冲液加入终浓度0.5μg/mlEB,染色电泳程进行,能随观察核酸迁移情况.EB带电荷,嵌入碱基增加 核酸刚性,使迁移率减慢,故宜用于测定核酸量,应电泳凝胶浸入0.5μg/mlEB水溶液10min进行染色.EB见光 易解,应于4℃避光保存,2、吖啶橙(acridine orange,AO):吖啶橙嵌入双链核酸碱基间,254nm紫外线激发发530nm绿色荧光;通静电与单链核酸磷酸基结合,254nm紫外线激发 产640nm红色荧光.区单链双链核酸,灵敏度别0.1μg0.05μg.吖啶橙染色操作要求严格,应 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.0)避光浸泡30min,搪瓷盘用该缓冲剂4℃脱色夜或22℃脱色1~2.3、银(Ag+)试剂:Ag+与核酸形稳定复合物,用甲醛使Ag+原银颗粒.AgNO3等试剂使聚丙烯酰胺凝胶单链,双链DNA及 RNA都染黑褐色.银染灵敏度比EB染色高200倍左右,比亚甲蓝染色高100~1000倍,于0.5mm厚凝胶,能检测0.5ng RNA,其缺点专性强,能与蛋白质,污剂反应产褐色,且DNA染色定量准确.银与DNA稳定结合,DNA破坏作用,适于DNA 片段收制备.4、亚甲蓝(methylene blue)RNA染蓝色,灵敏度高,且操作间.胶浸泡于0.02%亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac(pH8.3),4℃放置1~2h,用净水洗5~8h(反复换水),带型肉眼见,低检测量 250ng.
不要多想 这样的提问没有意义
很多烦恼都是我们自己找的
16 0 2017-03-24 0条评论 回复
您可能感兴趣的社区主题
加载中...
发布 评论