共聚焦显微镜可以先显示转染进去的绿色荧光，再显示荧光二抗么

（1） 利用有色荧光蛋白标记技术进行蛋白定位研究
此法也可称为活细胞定位.把两种具有相互作用的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光
蛋白（绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白）的载体中，共转染到功能细胞中（一般选用 COS7 细胞）表达带有荧光的融合蛋白.这样，相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光，可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行精确细胞定位或共定位时，必须用共聚焦荧光显微镜观测.因为共聚焦荧光显微镜（相当于给病人诊断的 CT）观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色，就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象，无法确定蛋白质共定位现象.在进行定位或共定位同时，也可以对细胞核进行染色.这样，在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.上面介绍的活细胞定位，其优点是表达的荧光蛋白荧光强，没有背景，观测方便.但缺点
是相互作用的蛋白由于标上荧光蛋白，实际上是两个融合蛋白.融合蛋白的定位结果或共定位结果是否与天然蛋白分布一致，有待于进一步确定.而利用免疫荧光标记技术可以避免这一缺点.
（2） 利用双色或多色染色的免疫荧光技术进行蛋白定位研究
免疫荧光的原理是，首先把细胞进行固定，然后用待检测靶蛋白的抗体（一抗）与细胞内
靶蛋白进行免疫反应，再用荧光素（如 FITC 和 TRITC 等）标记的二抗与一抗进行反应.这样就在细胞内形成免疫复合物（靶蛋白----一抗---二抗），结果靶蛋白被标上颜色，然后可用共聚焦荧光显微镜观测定位与共定位结果.
免疫荧光技术Z大优点就是可用来检测细胞内源性蛋白的定位及相互作用.当然也可以对
靶细胞进行转染表达目的蛋白，然后标记目的蛋白进行观测.免疫荧光技术的缺点是荧光相对较弱并且背景较高，结果受到干扰，所以这项技术不好掌握.为了结果的可靠性，要求严格设计阳性对照与阴性对照.
（3） 细胞内蛋白动态定位
有时细胞在正常状态下，有相互作用的蛋白在胞内可能暂时分开，没有共定位现象发生.
但是在某一个特定情况下，如细胞受到外界刺激时，细胞本身会产生应急反应，这时暂时分离的蛋白有可能发生相互作用，并产生共定位现象.所以在进行共定位研究时，可根据具体情况具体分析，必要时观测细胞内蛋白动态定位结果.