如何解决HPLC色谱峰峰型异常问题

1. 色谱图中未出峰
　　系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
　　2. 一个峰或几个峰是负峰
　　流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
　　3. 所有峰均为负峰
　　信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
　　4. 所有峰均为宽峰
　　系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
　　5. 所出峰比预想的小
　　样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
　　6. 出现双峰或肩峰
　　进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
　　7. 前伸峰
　　进样量或样品浓度高，溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
　　①柱温低：升高柱温；②样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂；③样品过载：降低样品含量；④色谱柱损坏：更换柱子。
　　8. 拖尾峰
　　柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至Z低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
　　9. 出现平头峰
　　检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
　　10. 出现鬼峰
　　进样阀残余峰，可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。
　　11. 峰分叉
　　①保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析，如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。
　　12. 峰变形
　　样品过载，减少样品载量。
　　13. 早出的峰变形
　　样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低极性样品溶剂
　　14. 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
　　柱外效应 ①调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) ②使用小体积的流通池
　　15. 酸性或碱性化合物的峰拖尾
　　缓冲不合适①使用浓度50～100 mM的缓冲液②使用Pka等于流动相pH值的缓冲液
　　16. 额外的峰
　　（1）样品中有其他组分：正常现象；
　　（2）前一次进样的洗脱峰：①增加运行时间或梯度斜率②提高流速；
　　（3）空位或鬼峰：①检查流动相是否纯净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。