蛋白定量分析

蛋白质的定量定主要有直接紫外吸收法、Bradford法和Lorry法三种。

蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，所以任何一个蛋白质都具有280nm附近的紫外吸收峰，在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系。

改良的Bradford法，蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。

Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。

总RNA和DNA都可以用紫外分光光度计在260nm和280nm处测定吸光度值进行浓度换算，dsDNA换算系数为50，RNA为40，oligoDNA20，ssDNA约为37.此外260nm/280nm的比值还可以反映出RNA和DNA的纯度。RNA比值应在2.0而DNA在1.8左右

mRNA的定量需要借助其他生物方法，现在Z常用的就是qPCR，就是定量PCR.其中有Z常用的是real-time PCR 这种方法可以相对定量或者定量出mRNA的表达水平.

蛋白定量分析，现在都有很多的现成的试剂盒，像bradford蛋白定量试剂盒，BCA蛋白定量试剂盒等等。很简单按说明书来就行。我用过北京创根胜泰的BCA挺方便的。

ZG药典推荐的方法是Lorry法。蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色，在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比，由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。
美国fda药典推荐的是Bradford法，蛋白质与染料考马斯亮蓝G-250结合，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
两者大多数情况下是都能给较为精确的对蛋白质定量。