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请教有经验前辈,EMSA实验所需溶液的配方

luxiaoli7 2017-03-30
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lfv的春天
1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团,比如:NH4,甘氨酸,精氨酸,Tris,等等;
2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂,如EDTA,EGTA,等等;
3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂,,比如DTT,防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂,比如SDS,防止Ni流失;
-1mM的PMSF,防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶YZ剂,比如0.1
蛋白被降解;
6. 缓冲液里可以加入甘油,防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀,甘油浓度Z高可达50%(v/v)
7. 应避免含碳酸氢钠,柠檬酸等物质;
8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间;
9. 可加入变性剂促溶,盐酸胍(Z高可6M),尿素(Z高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂,如Triton,Tween,NP40等,Z高2%,可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染
组氨酸标签蛋白的纯化
感觉这样的提问没有意义
建议自己下去查查资料
17 0 2017-03-31 0条评论 回复
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