不晓得你说的是RT-PCR(reverse transcription PCR)呢,还是实时PCR(real-time PCR)。如果是反转录的话,步骤如下:
1.电泳定量RNA或直接测定RNA浓度。
2.反转录体系:(20 μl)
RNA+DEPC 水: 11μl, RNA量1-5μg
Oligo dT: 1μl
5X RTase Buffer: 4μl (10X RTase Buffer 2μl + 2μl DEPC 水)
Ribololck Rnase Inhibitor: 1μl
dNTP: 2μl
RTase : 1μl
Total:20 μl
42℃放置60min,70℃放置5min终止反应。
3.稀释母液模板,进行PCR反应。