这里有两个问题,pcr产物测序和pcr过短的问题
熟悉pcr产物测序原理就明白,前面20-30个bp测出来市数据是不准确的,测序范围大概是800左右,超过的需要双向测序。
过短的pcr产物,pcr测序肯定需要纯化的,如果太短的话,在胶回收的时候很可能影响pcr产物浓度。一般pcr送样测序的条件A未纯化PCR产物的要求,1. 片段大于200bp;2.请提供50ul PCR扩增产物(总量1ug-2ug);3.取3ul样品,应该能够清晰的分辨出目的条带; 自带引物,引物浓度不低于5uM,并请注明。B纯化后PCR产物的要求1.PCR产物溶于蒸馏水中(请勿溶解在TE溶液中);
2.浓度大于20ng/ul,体积大于10ul,长片段需适当增加量;3.电泳检测条带专一; 自带引物
价格都不是很贵,一般能22-25元一次。