细胞迁移实验的注意事项

细胞迁移实验的注意事项

（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的ThinCert。常用的为8.0-μm孔径

（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径；

（2）根据待测细胞迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well

ThinCert接种细胞数约为2≈5×104/well，迁移时间12≈36小时；

（3）由于Greiner公司的24-Transwell内含24个独立的ThinCert，为了避免

操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Greiner）；

（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的

上清加50μg/mlFN（Fibronectin），具体可查阅相关文献；

（5）细胞悬液加入膜ZY，尽量保证液面水平；

（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜

表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊

子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；

（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；

（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。

细胞侵袭实验（cellinvasionassay）

实验材料

（1）Matrigel(BD5mg/ml)，-20℃保存

（2）其余材料同迁移实验

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