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〔原理〕过氧化物酶分解H2O2的过程中，下面反应不直接发生：AH2（供氢体）+H2O2→A（供氢体的氧化物）+2H2O2实验可知，有称为复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、的酶底物（受氢体）复合体生成，在复合体Z后分解为酶和水时，游离的原子氧使供氢体氧化而显色。酶组织化学中所使用的供氢体应是含有色原性基团的发色物质，如奈酚和联苯胺。
免疫组化染色步骤（以ABC法为例）
溶液的配置：
1.0.1MPBS2000ml：NaCL18g,NaH2PO42H2O0.8g,Na2HPO412H2O12g.共六份
2.柠檬酸盐缓冲液：
贮存液：0.1M柠檬酸溶液（A）：21.01g柠檬酸+1L蒸馏水
0.1M柠檬酸三钠溶液（B）：29.41g柠檬酸三钠+1L蒸馏水
工作液：9mlA液+41mlB液+450ml蒸馏水→0.01M柠檬酸盐缓冲液
3.0.03%H2O2-甲醇：30%H2O20.4ml+400ml纯甲醇→充分混匀
4.20%甘油：80ml纯甘油+320ml蒸馏水
5.稀释抗体：1300，1400，1600（临用前配）
6.酒精的配置
染色步骤：一步法
1.载玻片烤箱中60℃40′。
2.二甲苯Ⅰ，60℃20′（水浴箱中），二甲苯Ⅱ，室温15′。
3.脱水，1**%→95%→85%→75%酒精，每级均为3′。
4.蒸馏水冲洗，PBS5′1
5.微波炉修复抗原：0.01M柠檬酸盐缓冲液，99℃肺20′，心肾12′
6.PBS3′*3
7.0.03%H2O2-甲醇，室温20′
8.PBS冲洗，PBS3′*3，甩干或纸巾吸去多余液体（勿碰到组织），PAPPen划境线。
9.blocksolution封闭抗原，室温10′。
10.倾出封闭液，不洗，滴加一抗（60ul），4℃过夜或37℃1～2h。
11.PBS冲洗，3′*3。
12.除去PBS，滴加A增强剂，室温25′。
13.PBS冲洗，3′*3。
14.除去PBS，滴加B剂，室温35′。
15.PBS冲洗，3′*3。同时配置DAB显色剂。
16.除去PBS，DAB显色10′（在显微镜下观察染色程度控制染色时间）。蒸馏水冲洗。
17.复染：苏目素均匀滴加2滴，40′′，蒸馏水冲洗，60℃温水泡半分钟。
18.脱水：75%酒精→85%→95%→1**%（3次），每级3′。
19.透明：二甲苯Ⅰ3′，二甲苯Ⅱ3′。
18.封片：中性树脂，加盖玻片（组织部位切勿残留小气泡），60℃0.5h烘干。
结果：棕褐色反应产物代表抗原X的定位。
拍照
1.更换样品时，除了调整焦距和视野外，显微镜上的其他部件都不能动！所有的样品必须一次拍摄完全。特别是在拍摄过程中，不要一会用高倍镜，一会用低倍镜，来回切换物镜。
2.数码相机必须设置为手动曝光，并且保持每张照片用同样的曝光条件，同样的曝光时间，同样的光圈。特别要注意的是，一定要将数码相机的自动白平衡功能给关掉
3.免疫组化切片一般染色不太深，因此拍摄出的照片颜色较浅，就让它浅。拍摄出的照片中空白部位应尽可能呈现纯白色。测量其灰度应在250左右。如果呈现淡蓝色，一般是相机自动白平衡在起作用。另外一个因素是显微镜灯光电压不正确。要使灯光本身的色温正确。既不偏黄，也不偏蓝。
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