DNA转染试剂说明书

DNA转染试剂说明书

DNAFectTransfectionReagent

目录号：YJ0860

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组分说明

Catalogno.YJ0860YJ0860A

KitSize0.5ml1ml

DNAFectTransfectionReagent0.5ml1ml

产品简介

DNAFect是一种GX的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。

注意事项

1.转染试剂使用前应先震荡摇匀。

2.转染效率与细胞密度有很大关系，不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。

一般贴壁细胞转染的Z佳细胞密度是80-90%，悬浮细胞的Z佳细胞密度为3-5×105细胞/ml，用于转染的Z佳细胞密度

3.转应染根据不同的时不要在培细养胞基中加入抗生素，否类型或用途而异。则会导致细胞死亡。

操作步骤

对于大部分的细胞系，DNA与DNAfect的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。

1.贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细悬浮细胞：在胞，待细胞转细染之前，在胞长至80-90%24孔板的满时进每行孔中加入转染。500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105个细胞。

2.转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：

a.取适量DNA，加入25μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。

b.取适量DNAfect，加入25μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。

c.孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNAfect混合（使DNA以及DNAfectin的终总体积为50μl），轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟（溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率）



注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。

3.将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基，然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24细胞孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。

4.将细胞置于含5%CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500μl生长培养基。

5.18-48小时后进行转染基因表达的检测。

6.对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。

注：(1)该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNAfect用量见附表，

该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。

(2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNAfect具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。

(3)优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。

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