亲和层析蛋白纯化系统层析法亲和层析蛋白纯化系统使用前才添加成10mMβ-mercaptoethanol.BufferB-300/20:BufferB-300/0加有20mMimidazoleBufferB-300/250:BufferB-300/0加有250mMimidazole亲和层析蛋白纯化系统方法步骤：1、亲和层析胶体1mL已经装填在管柱内，成为一淡蓝色胶柱。请把管柱架直在铁架上，去除下方的填塞物，用bufferB-300/0流洗20mL后塞住出口，准备注入样本。2、除去胶面上方的缓冲液，并取出样本(IEX)使其回到室温，慢慢用滴管加到亲和胶体上，小心勿弄乱胶体表面；让样本没入胶体中，同时收集流出液每管2.5mL。3、待样本全部进入胶体后，关闭出口，再慢慢加入bufferB-300/20,打开出口收集流出液；bufferB-300/20共流洗30mL。4、接着以bufferB-300/250流洗30mL,方法同上，收集。5、所有收集均定量蛋白质并测定酶活性，取收集酶活性Zgao的数个，共得多少mL(AF)，保留100μL以供分析。
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2004-08-30
