碘[125I]白细胞介素-4放射免疫试剂盒说明书

碘[125I]白细胞介素-4放射免疫试剂盒说明书
【药品名称】
通用名称：[125I]白细胞介素-4放射免疫分析药盒
英文名称：Iodine[125I]Interleukin-4RadioimmunoassayKit
汉语拼音：Dian[125I]BaiXibao极esu-4FangsheminanyifenxiYaohe
【适应症】
白细胞介素-4放射免疫试剂盒说明书
概述及临床意义：白细胞介素-4（Interleukin-4，IL-4）是由活化的Th2细胞产生的一种细胞因子，分子量15KD。IL-4具有多种生物学效应，在T细胞、B细胞、巨噬细胞的增殖分化及功能调控方面起重要调节作用。据文献报导，在硬皮病、多发性硬化症、自身免疫甲状腺疾病、炎性肠道疾病、支气管哮喘、特应性皮炎等变态反应过敏性疾病时，机体IL-4水平显著增加。本试剂盒利用自制兔抗IL-4血清建立IL-4放射免疫测定法，通过测定人体外周血清、体液或培养上清液中IL-4水平，可辅助临床某些疾病的诊断，为进一步探讨其作用机制与临床药理，对各系统疾病的FZ提供了一项可靠的手段。
测定原理：利用液相竞争YZ原理，采用平衡法对样品进行测定。待测样品或标准与限量的抗血清及标记抗原加在一起进行竞争性结合反应，反应完全后，加入免疫分离剂，分离出抗原-抗体复合物，测定复合物的放射性（B），计算各标准管的结合率（B/B0﹪）。作出标准曲线，查出样品浓度。
【成份】
药盒组成及配制
1. 缓冲液（PBS）：1瓶（液体），10ml，用前加蒸馏水稀释至50ml。
2. IL-4 “0”标准品:1瓶（液体），2ml，直接使用。
3.IL-4标准品：5瓶（白色，冻干粉）：用缓冲液_____ml溶解，（如不填写，每瓶加1ml溶解）分别为0.3，0.9，2.7，8.1，24.3ng/ml。
4.IL-4抗血清：1瓶（白色，冻干粉）：用缓冲液_____ml溶解（如不填写，100T药盒加10.5ml溶解,50T药盒加5.5ml溶解）。
5.125I-IL-4：2瓶（白色，冻干粉）：每瓶用缓冲液_____ml溶解，将两品瓶125I充分混匀后使用。
6.PR分离剂：1瓶（液体），100T药盒60ml，50T药盒30ml，使用前充分摇匀，直接使用。
样品收集
1、血清：取静脉血2ml，注入试管待凝固后，4℃3000rpm离心，10min，分离血清。放-20℃，样品可保存2个月，在-70℃以下可存放半年。测定前使样本置于室温或冷水中复融，再次4℃3000rpm离心，5min，取上清测定。注：鼠血清值较低，需浓缩5-10倍，再加样测定，测定兔血清时，应改用25﹪PEG500μl作分离剂，离心前NSB、S0、S1–S5管补加γ球蛋白100μl，样品管加PBS各100μl，然后再加25﹪PEG500μl。测兔血清时Z好每个标本做一个U0，25﹪PEG和γ球蛋白由我公司提供。
2、组织：取出活组织，吸去血迹，称重，尽快加入生理盐水1ml碾磨，制成匀浆，4℃3000rpm离心，15min，取上清，-20℃以下保存。测定前Z好做预实验确定样品稀释度。取3-5份做小样，可将样品做原倍，1：5，1：20倍稀释，选择合适的稀释度。
另外，每种组织的样品非特异结合（U0）可能有些差异，每份标本Z好单独做一个U0或每组做一个U0。取组织的重量一般在300～400mg左右为好。
3、细胞培养液或其它体液：如样品浓度高，可直接加样测定，如浓度低需将样品浓缩5-10倍，再加样测定，可取样品1ml，加入测量用的放免塑料管中再冷冻干燥机上冷冻抽干，用0.2ml生理盐水复溶，做为样品管直接测定。
白细胞介素-4放射免疫试剂盒说明书
测定方法
本实验采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作。
IL-4RIA加液程序（μl）
 T NSB S0 S1~S5 样品 U0
缓冲液 - - - - - 100
“0”标准 - 300 200 - - -
标准液 -   200 - -
待测样品 - - - - 200 200
抗血清 - - 100 100 100 -
125I-IL-4 100 100 100 100 100 100
充分混匀4℃放置24h
分离剂 - 500 500 500 500 500
充分混匀，室温放置20min，4℃3500rpm,离心25min，吸弃上清测各管沉淀cpm数，
结果计算
1、以B/T计算NSB、S0结合百分率，以B/BO计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。
NSB％＝（NSB管的cpm数÷T管的cpm数）×100％
      Bo％＝（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）÷T管的cpm数×100％
B／Bo％＝（标准或样品管的cpm数－NSB管的cpm数）÷（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）×100％
2、组织样品得出样品浓度后，再根据称取组织量，计算出每mg组织中的量。
主要技术指标
1、NSB：<5%。
2、灵敏度：0.165ng/ml;
3、标准曲线范围：0.3~24.3ng/ml。
4、批内变异系数：<8%    批间变异系数：<15%
5、特异性：本抗血清与EPO、TNF、GM-CSF、IL-8、IL-2、IL-6均无交叉反应。
正常血清参考值
0.78±0.33ng/ml（n=50），仅供参考。
各实验室应根据自己的条件建立自己的正常对照组。
【放射性核素半衰期】
碘[125I]物理半衰期（T½）:60天
【注意事项】
1、使用本药盒的实验室应具有“放射性同位素使用许可证”，使用过程中产生的放射性废物应按国家有关规定处理
2、PR试剂在使用前需充分混匀，必要时边加边混，不可冰冻保存。
3、如果用户测定的样品是兔血浆，请在订药盒时提前告知。
4、用户如遇特殊情况，收到药盒后不能在当月使用，请您将标准品、抗血清冷冻保存，缓冲液、分离剂4℃保存，待下次只单购一瓶标记即可。
5、药盒内任何一种试剂均可单独购买。
6、本药盒每月快件寄出，一般在月底寄下月产品，用户请在每月20日前通知我们，以便及时寄出。
【贮藏】
常温运输，4℃保存
【有效期】
1个月
【执行标准】
放射免疫分析基本原理。
本药盒提供给YL科研单位和高等医学院校及各大医院做科学研究用，可用于人及各种动物的血样、尿液、组织匀浆液及各种体液的测定
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