细胞凋亡－DNALadder抽提试剂盒
细胞凋亡－DNALadder抽提试剂盒产品编号产品名称包装C0007细胞凋亡-DNALadder抽提试剂盒50次产品简介：Ø瑞齐生产的细胞凋亡－DNALadder抽提试剂盒，是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提Z小片断为180-200bp的DNAladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。ØDNAladder也称DNAfragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNAladder，就可以判定细胞发生了凋亡。Ø本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。包装清单：产品编号产品名称包装C0007-1样品裂解液30mlC0007-2蛋白酶K130μlC0007-310M醋酸铵6mlC0007-4TE6ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。10M醋酸铵和TE也可以室温保存。注意事项：Ø需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。Ø为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：1.样品收集a)对于组织样品：切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。或直接冰浴上匀浆。b)对于贴壁细胞：胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。c)对于悬浮细胞：1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。2.DNAladder抽提a)每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。b)对于上述收集好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，Vortex混匀，充分裂解组织或细胞。c)50℃水浴消化(通常12-20小时皆可)。d)加入500微升Tris平衡苯酚。e)Vortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。4℃，12,000g离心5分钟。f)缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次(同步骤e)。g)缓慢吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次(同步骤e)。h)慢慢吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。-20℃冻存1小时，以充分沉淀小片断DNA。℃冻存效果更佳。i)4℃，12,000g离心10分钟，弃上清。j)加入600微升70%乙醇，轻轻颠倒约2次。4℃，12,000g离心10分钟，小心吸去上清。注意：70%乙醇洗涤的时候，千万注意避免损失一些细小的DNA沉淀，这些沉淀中大部分是你所需的DNAladder。k)尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100微升TE溶解DNA。注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇，以溶解DNA沉淀。l)取部分抽提得到的DNA，1%琼脂糖凝胶电泳分析。如果细胞发生凋亡，就可以观察到典型的DNAladder。电泳时一定要注意换用新鲜配制的电泳液，DNA凝胶也要用新鲜配制的电泳液配制并新鲜配制后使用。电泳时为获取Z佳的电泳效果使ladder充分分开，电泳速度宜适当慢一些，凝胶宜适当长一些，而加样孔宜更加扁平一些。选取适当较薄的梳齿，往往会获得更好的ladder电泳效果。使用本产品的文献：1.WangN,HouL,ZhuZY,ZhangJY,JuCX,GeYL,YueW.Effectof2,3-dioxoindolineonapoptosisandhumantelomerasereversetranscriptasemRNAinSH2SY5Ycells.ChinesePharmacologicalBulletin.2007May;23(5):680～4.2.QianYF,WangH,YaoWB,GaoXD.AqueousextractoftheChinesemedicine,Danggui-Shaoyao-San,inhibitsapoptosisinhydrogenperoxide-inducedPC12cellsbypreventingcytochromecreleaseandinactivatingofcaspasecascade.CellBiolInt.2008Feb;32(2):304-11.3.BaiY,LiQ,YangJ,ZhouX,YinX,ZhaoD.p75(NTR)activationofNF-kappaBisinvolvedinPrP106-126-inducedapoptosisinmouseneuroblastomacells.NeurosciRes.2008Sep;62(1):9-14.Epub2008May23.4.CaiL,WangH,LiQ,QianY,YaoW.SalidrosideinhibitsH2O2-inducedapoptosisinPC12cellsbypreventingcytochromecreleaseandinactivatingofcaspasecascade.ActaBiochimBiophysSin(Shanghai).2008;40(9):796-802.5.WangH,XuY,YanJ,ZhaoX,SunX,ZhangY,GuoJ,ZhuC.ActeosideprotectshumanneuroblastomaSH-SY5Ycellsagainstbeta-amyloid-inducedcellinjury.BrainRes.2009Aug4;1283:139-47.Epub2009Jun9.6.ChaiJ,XiongQ,ZhangP,ZhengR,PengJ,JiangS.InductionofCa2+signalmediatedapoptosisandalterationofIP3R1andSERCA1expressionlevelsbystresshormoneindifferentiatingC2C12myoblasts.GenCompEndocrinol.2010;166(2):241-9.Epub2009Aug31.7.LiJ,XuZ,TanM,SuW,GongXG.3-(4-(Benzo[d]thiazol-2-yl)-1-phenyl-1H-pyrazol-3-yl)phenylacetateinducedHepG2cellapoptosisthroughaROS-mediatedpathway.
ChemBiolInteract.2010Feb12;183(3):341-8.Epub2009Dec16.
2004-07-13
