公司是一家技术服务型渠道企业,在行业发展中所承担的角色是一种沟通产出方和需求方(科研和市场)的媒介,我们致力为行业人才提供了包括科研在内的更多出口,为科研提供了有力的硬件支持,有效地促进科研和市场需求结合,提高了科研成果的转化效率,使得科研更具活力。
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨钙素(OC)含量。
elisa试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨钙素(OC)水平。用纯化的大鼠骨钙素(OC)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入骨钙素(OC),再与HRP标记的骨钙素(OC)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠骨钙素(OC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠骨钙素(OC)浓度。
elisa试剂盒组成
120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶
2酶标试剂3ml×1瓶8标准品(3200ng/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1600ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
800ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
400ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
200ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
100ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。