GX液相色谱法测定骨康口服液中补骨脂素和异补骨脂素的含量

【摘要】目的建立骨康口服液中有效成分的含量测定方法。方法采用HPLC法测定骨康口服液中有效成分含量。结果补骨脂素和异补骨脂素两种成分均达到良好分离，在测定范围内线性良好，回收率均在99%～101%之间。结论所建立的定量方法简便可行、重复性好，可作为骨康口服液的质量监控。

　　【关键词】骨康口服液补骨脂素异补骨脂素GX液相色谱法

　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodofHPLCfordeterminingpsoralenandisopsoraleninGukangOralLiquid.MethodsTheeffectivecomponentsinGukangOralLiquidweredeterminedbyHPLC.ResultsTheresolutionandthelinearitywerefinewiththerateofrecoveryofpsoralen99.96%,RSD＝1.16%;therecoveryrateofisopsoralenwas100.09%,RSD=0.60%.ConclusionThequantitativemethodfordeterminingtheingredientsofGukangOralLiquidissimple,feasibleandrepeatable,andcanbeusedforqualitycontrolofGukangOralLiquid.

　　Keywords:GukangOralLiquid;Psoralen;Isopsoralen;HPLC

　　骨康口服液由补骨脂、淫羊藿、肉苁蓉、白芍、黄芪等10味药材组成，具有补肾壮骨，HX通络，健脾益气的功效，临床上主要用于ZL妇女更年期引起的骨质疏松症。骨康口服液共煎，有利于补骨脂素与异补骨脂素的煎出［1,2］，故采用水提醇沉工艺制备［3］。鉴于补骨脂素、异补骨脂素可相互转化［4,2］，原标准采用TLCS法测定补骨脂素、异补骨脂素两者的总量［5］。但TLCS法变异大，故选用HPLC法同时测定骨康口服液中补骨脂素与异补骨脂素的含量。现将研究结果报道如下：

　　1仪器与试药

　　DIONEXSUMMITGX液相色谱仪（PDA-100检测器、STH585柱温箱、P680HPLC泵、ASI-100自动进样器）,Chromeleon色谱工作站；补骨脂素（供含量测定用，110739-200309）、异补骨脂素（供含量测定用，110738-200410），均由ZG药品生物制品检定所提供；骨康口服液（批号：20061009，20061012，20061015），由广州中医药大学新药开发研究ZX提供；乙腈为色谱纯（Merck，1192230）其他试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2.1色谱条件

　　色谱柱：PhenomenexlunaC18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%冰醋酸为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长：246nm；流速：1.0mlmin-1；柱温：25℃；进样量：10μl；理论塔板数均不低于3000。

　　2.2溶液的制备

　　2.2.1对照品溶液的制备

　　精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品适量，分别置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，以此作为对照品贮备液。精密吸取上述各对照品贮备液适量，加甲醇制成每毫升含补骨脂素35μg，异补骨脂素44μg的混合溶液，摇匀即得。

　　2.2.2供试品溶液的制备

　　取本品10支，混匀，精密吸取药液10ml，加提取4次，10ml/次，分取层，60℃挥干,用甲醇溶解残渣，并转移至5ml容量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

　　2.2.3阴性对照溶液的制备

　　取中除补骨脂外的其余成分制成缺补骨脂阴性对照品，按“2.2.2”项下的供试品制备方法处理得缺补骨脂阴性对照液。

　　2.3线性关系考察

　　精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，14μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064Wh/2h>峰面积，并以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，补骨脂素在70～490ng范围内呈良好线性关系，异补骨脂素在88～616ng范围内呈良好线性关系，回归方程分别为：补骨脂素：Y=8224.5X-48.1326,r=0.9999；异补骨脂素：Y=7371.7X-52.4752,r=0.9999。

　　2.4精密度实验

　　精密吸取上述补骨脂素和异补骨脂素对照品溶液10μl连续进样5次，测得峰面积积分平均值补骨脂素为3211.929，RSD为0.07%；异补骨脂素为3676.707，RSD为0.16%，表明分析方法精密度良好。

　　2.5重复性实验

　　按照拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号：20061009）制备供试品溶液，平行操作6份，结果测得补骨脂素平均含量为0.075mgg-1，RSD为2.39%；异补骨脂素平均含量为0.072mgg-1，RSD为2.54%，表明本测定方法具有较好的重复性。

　　2.6稳定性实验

　　精密吸取同一供试品溶液10μl，在0，2，4，8，12h分别进样，记录峰面积并计算RSD，结果：补骨脂素平均峰面积为1330.393，RSD为0.46%；异补骨脂素平均峰面积为1056.411，RSD为1.6%，表明样品中补骨脂素和异补骨脂素在12h内稳定。

　　2.7专属性实验

　　取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液,按本色谱条件各进样10μl。结果见图1。结果显示，在本色谱条件下,阴性对照无干扰。

　　2.8加样回收率实验

　　精密吸取已知含量的同一批样品（20061009）10ml，分别精密加入一定量的补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，按供试品溶液制备方法制备并测定，按公式回收率（P）（%）=（测得量-加入量）/样品量×1**%计算回收率。结果见表2。表明本方法具有良好的回收率。表1骨康口服液中补骨脂素、异补骨脂素的HPLC测定梯度洗脱条件（略）表2加样回收率实验结果（略）表3样品中补骨脂素、异补骨脂素含量测定结果（略）

　　2.9样品测定

　　取骨康口服液3批,照上述方法处理后测定,记录峰面积,代入回归方程计算样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量。结果见表3。

　　3讨论

　　3.1提取溶媒的选择

　　本品由多味中药组成，且由水煎煮浓缩制得，活性成分多，极性强，影响鉴别的干扰因素较多。笔者曾用水直接稀释样品进样分析，结果杂质峰较多，分离效果差。考虑到补骨脂素与异补骨脂素为呋喃香豆素类成分，因此采用提取。实验结果表明，该法可使样品中的补骨脂素与异补骨脂素提取完全。

　　3.2流动相的选择

　　目前《ZG药典》2005年版和文献报道中HPLC法测定补骨脂素与异补骨脂素大多采用甲醇-水体系［6～9］，但经过实验发现，这些体系均不适用于该制剂的分析，本文选用乙腈-0.1%醋酸溶液梯度洗脱，可以同时测定补骨脂素与异补骨脂素的含量，且获得较好的分离效果，且峰形更佳。本法操作简便，精密度高，重现性好，是控制骨康口服液内在质量的有效方法。

　　【参考文献】

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　　［2］苏子仁，徐必达，刘庆思，等.磷脂对骨康方补骨脂素、异补骨脂素煎出增溶作用探讨［J］.ZG实验方剂学杂志,1997,3（3）:5.

　　［3］吴雪茹，苏子仁，施佳平，等.骨康口服液工艺优化研究［J］.中成药,1999,21（5）：218.

　　［4］苏子仁，徐必达，刘庆思.补骨脂素、异补骨脂素在骨康提取精制过程中化学转化的研究［J］.ZG实验方剂学杂志，1997，3（6）：1.

　　［5］曾惠芳,苏子仁,刘庆思.骨康口服液中补骨脂素,异补骨脂素的含量测定［J］.中药新药与临床药理，1999,10（4）：237.

　　［6］国家药典委员会.ZG药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：129,229,577.

　　［7］陆蓓,吴韶铭.HPLC法测定益肾灵颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量［J］.ZG药品标准,2002,3（4）:23.

　　［8］王锦红,孙传梅.GX液相色谱法测定长寿长乐补酒中补骨脂素和异补骨脂素含量［J］.ZG药业,2006,15（11）：42.

　　［9］李学松,范兴东.补肾益脑胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定［J］.中成药,2006,28（6）:810.

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