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抗原抗体反应时，只有在两者分子比例合适的时候才会出现强的反应，些时称为抗原－抗体反应的等价带（Zoneofequivalence），如果一方过剩，早于过剩一方的结合价不能被完全占据，多呈游离的小分子复合物形成，或形成的复合物易解离，不能被肉眼察见。在等价带前后分别为抗体过剩还和抗原过剩带，此时两者比例不适合，沉淀量少，上清液中可测邮游离的抗原或抗体；其中抗体过剩时为前带现象（Prezone），抗原过剩时为后带现象（Postzone）。如果两比例合适，抗体分子的两个Fab片段分别与两个抗原表位结合后相互交联形成具有立体结构的巨大网格状复合体，在反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可以分辨的沉淀物或凝集物。当两者比例不合适时，只能形成较小的沉淀物或可溶性的复合物。
抗原抗体的结合取于两个因素：一是抗体对相应抗原的亲和国；二是环境因素对复合物的影响。高亲各性的抗体上抗原结合点与抗原表位在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离；低亲和性抗体与抗原形成的复合物较易解离、在一定的外界环境下如低pH、高浓度盐、反复冻融下，抗原抗体复合物也可被解离，解离后的抗原抗体仍保持原有的结构、活性及特异性。其中改变pH和离子强度是常用的促进解离的方法，借此可利用亲和色谱的方法来纯化抗原或抗体。
1抗原抗体的性质
抗原-抗体反应的整体强度受3个因素控制：抗体对表位的内在亲和力，抗原抗体的结合价以及参与反应成分的立体结构。其中亲和性和特异性是反应的关键因素。
2电解质
抗原抗体发生特异性结合后，由由亲水性胶体变为疏水性胶体，电解质的存在会使抗原-抗体复合物失去电荷而沉淀或凝集，出现可见反应。常用0.85%的氯化钠或各种缓冲溶液作为抗原抗体的稀释液，用来中和胶体粒子上的电荷，促使抗原-抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝聚物。
3酸碱性
蛋白质具有两性电离的性质，抗原抗体的反应必须在合适的PH环境中进行。一般为pH=6.0~8.0，超出此范围会影响抗原抗体的理化性质，出现假阴性反应。
4温度
在一定的范围内适当的温度会增加抗原抗体分子的运动，增加分子碰撞的机会，使反应速度加快。一般抗原抗体的温度为37℃,温度高于50℃，会使结合的抗原抗体解离、变性；温度太低，反应速度变慢。但某些抗原-抗体反应有其独特的适合温度，如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合好，20℃以上反而解离。此外适当震荡或搅拌也可促使抗原抗体分子的接触，加速反应的进行。
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