Pfu DNA聚合酶使用方法

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PfuDNA聚合酶使用方法
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产品描述：PfuDNA聚合酶是pyrococcusfuriosis菌中的热稳定性聚合酶，在70～80℃时，镁离子存在的情况下可催化核苷酸沿着5’→3’的方向发生聚合反应，催化DNA的合成。该酶分子量约为90KD。与TaqDNA聚合酶不同，PfuDNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性，即具有校正功能。建议需要高度保真性的PCR扩增反应和引物延伸中使用PfuDNA聚合酶。使用PfuDNA聚合酶的PCR产物是平末端。

来源：表达PfuDNA聚合酶的大肠杆菌。

酶储存缓冲液：50mMTris-HCl，pH8.2；0.1mMEDTA；1mMDTT；0.1%NonidetP40；0.1%Tween20；50%甘油。

单位定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmmoldNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需要的酶量为一个单位。

PfuDNA聚合酶的用途：

1）常规PCR反应中的DNA高保真体外扩增；

2）基因定点突变和拼接。

PfuDNA聚合酶的注意事项：

1、酶浓度：建议在50ml的体系中使用1.25个单位的PfuDNA聚合酶，因为酶存在3’-5’外切酶活性，高浓度的酶可能会增加降解引物的可能性。好在加完dNTP后再添加PfuDNA聚合酶。并在有冰浴的条件下混合PCR反应中的各种成分。

2、延伸时间：PfuDNA聚合酶的延伸速率低于TaqDNA聚合酶，大约为一分钟600个碱基（TaqDNA聚合酶大约为一分钟2000个碱基），因此建议扩增1Kb的DNA用两分钟的延伸时间。对于大多数的反应而言，25～35个扩增循环就足够了。

保存：-20℃保存至少一年。
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2004-08-16