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鸭瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制及初步应用
DPV 经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心、蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗 DPV 特异性 IgG 抗体的间接 ELISA 方法,并对谊法进行了标准化研究, 确定了Z佳工作条件.在此基础上研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性等方面进行研究.结果表 明:4.75μg/孔的纯化 DPV 抗原包被反应板可获得良好特异性和敏感性,1:100稀释的待检血清样品反应后 OD_(405)值换算为抗体滴度的标准直线方程为 y=1.573+3.552x(r~2=0.9528,n=20).试剂盒在4℃保存3个月或-20℃保存10个月后各项性能都很好.应用该试剂盒对皮下 注射、口服和滴鼻免疫 DPV 弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗 DPV 特异性 IgG 抗体滴度进行测定,结果表明:皮下免疫鸭于第6d、口服和滴鼻免疫鸭于第9d 可在血清中检测到 DPV 特异性抗体并于第36d 达到滴度高峰,且至60d 时依然可检测到高滴度抗体.该试剂盒可用于血清流行病学调查和鸭场 DP 免疫抗体水平的监测.
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