人类巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）ELISA试剂盒说明
人类巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）ELISA试剂盒仅可用于科学研究，不得用于可用于医学诊断
人类巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）ELISA检测试剂盒使用说明
检测原理：该试剂盒采用双抗体一步法三明治酶联免疫吸附测定（ELISA）。在预先用巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）抗体包被的包被微孔中，依次添加标本，标准品和HRP标记的检测抗体，孵育并彻底清洗。用基材TMB显色。 TMB在过氧化物酶的催化作用下转化为蓝色，在酸的作用下转化为ZZ的黄色。颜色的强度与样品中的巨噬细胞炎症蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）正相关。用酶标仪在450nm波长处测量吸光度（OD值），以计算样品浓度。
样品采集，处理和保存的方法：
1。血清：使用无热原和无内毒素的试管，以避免在手术过程中刺激任何细胞。采血后，用3000离心机离心10分钟以快速，仔细地分离血清和红细胞。
2。血浆：EDTA，柠檬酸盐或肝素用于抗凝。以3000 rpm离心30分钟以提取上清液。
3。细胞上清液：以3000 rpm离心10分钟以去除颗粒和聚合物。
4。组织匀浆：在组织中加入适量的生理盐水并捣碎。以3000 rpm离心10分钟以提取上清液。
5。保存：如果样品采集后没有及时检测，请将其分成一次，并保存在-20℃下，以免反复冻融。在室温下解冻，确保样品完全融化。
自备物品：
1.37℃培养箱
2。酶标仪（450nm）
3。高精度加料装置和喷嘴：0.5-10uL，2-20uL，20-200uL，200-1000uL
操作注意事项：
1。将试剂盒存放在2-8℃，在室温下平衡20分钟。从冰箱中取出的浓缩洗涤液将结晶。这是正常现象。在使用前，将水浴加热以完全溶解晶体。
2。实验中未使用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）并保存。
3。浓度为0的标准S0可被视为阴性对照或空白；按照说明进行操作时，样品已被稀释了5倍，ZZ结果乘以5即为样品的实际浓度。
4。严格遵守时间，添加的液体量以及孵育说明手册中指示的顺序。
5。使用前请摇匀所有液体成分。
人类巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP-3α/ CCL20）ELISA试剂盒组成
名称96孔配置48孔配置说明
微孔ELISA板12孔×8条12孔×4条无
标准0.3mL * 6管0.3mL * 6管无
样品稀释液6mL 3mL无
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检测抗体-HRP 10mL 5mL无
20×洗涤缓冲液25mL 15mL按说明稀释
底物A 6mL 3mL无
底物B 6mL 3mL无< / div>
停止溶液6mL 3mL无
2张密封膜2张无
说明1拷贝1拷贝无
自封袋1片1件无
注：标准品（S0-S5）的浓度为：0、30、60、120、240、480 pg / mL
试剂制备：20×洗涤缓冲液稀释：将蒸馏水按1:20稀释，即20倍慢速洗涤溶液的1份加19份蒸馏水。
如何清洗盘子：
1。自动洗板机：将350μL的洗液注入每个孔中，浸泡1分钟，然后洗板5次。
2。手动清洗板：甩开孔中的液体，用清洗液填充每个孔，静置1分钟，甩掉孔中的液体，在吸水纸上拍干，然后清洗板5次。
操作步骤：
1。从已在室温下平衡20分钟的铝箔袋中取出所需的板条，然后将剩余的板条密封在自封袋中，然后返回4°C。
2。设置标准孔和样品孔，每个孔中添加50μL不同浓度的标准液；
3。将10μL待测样品加到样品孔中，再加入40μL稀释剂。未添加空白孔。
4。除空白孔外，在标准孔和样品孔的每个孔中添加100μL辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，并在37℃下用密封膜密封反应孔。在水浴或恒温箱中孵育60分钟
5。丢弃液体，在吸收纸上拍干，在每个孔中充满洗涤液，静置1分钟，甩掉洗涤液，在吸收纸上拍干，重复洗涤5次（也可用洗板机洗涤板） ）。
6。在每个孔中分别加入50μL底物A和B，并在黑暗中于37℃孵育15分钟。
7。在15分钟内将50μL终止溶液添加到每个孔中，在450nm波长下测量每个孔的OD值。
结果判断：绘制标准曲线：在Excel工作表中，将标准浓度作为横坐标，将相应的OD值用作纵坐标，为标准绘制线性回归曲线，然后计算根据曲线方程值确定每个样品的浓度。
工具包性能：
1。准确性：标准品和预期浓度相关系数R值的线性回归，大于或等于0.9900。
2。灵敏度：*低检测浓度小于1.0 pg / mL。
3。特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应。
4。重复性：板内和板之间的变异系数小于15％。
5。储存：2-8℃，避光和防潮。
6。有效期：6个月
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2006-10-18
