GX液相色谱结合兰博柱后衍生系统 测定维生素B1

GX液相色谱柱后衍生法测定维生素B1

维生素B1又称硫胺素，是人体生长和发育所必需的营养物质，在食品和保健品中广泛应用，因此如何快速准确的测定就显得非常重要。维生素B1经氧化后，与铁KCN在碱性条件下可以生成有荧光的物质。本方法以此为依据，建立了GX液相色谱-柱后衍生法测定维生素B1。

1材料和方法

1.1试剂

维生素B1标准品，购自Sigma公司；无水醋酸钠，冰醋酸，氢氧化钾，水为屈臣氏蒸馏水，甲醇为色谱纯。

0.05mol/L醋酸钠溶液（pH=4.5）：称取醋酸钠4.10g加水溶解，并用冰乙酸调节pH=4.5，然后稀释至1000ml；

0.25g/L碱性铁KCN溶液（吸取10g/L铁KCN溶液5ml用100g/L的氢氧化钾溶液稀释至500ml）。

1.2仪器

分析型GX液相色谱仪（HPLC），由AS3000自动进样器，LabllianceSeries高压泵，天津兰博第三代PCR3柱后衍生装置，Varian9075荧光检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支KromasilC18色谱柱(4.6x250mm,5um)；AXM-8Temp.柱温箱

1.3色谱条件

色谱柱：KromasilC18色谱柱(4.6x250mm,5um)，天津兰博实验仪器有限公司；

流动相：0.05mol/L醋酸钠溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5；

流速：1.0ml/min；

柱温：室温；

进样量：10ul；

衍生剂：0.25g/L碱性铁KCN溶液；

流速：0.3ml/min；

衍生温度：室温；

检测波长：激发波长375nm，发射波长435nm。

2试验结果

2.1流动相的选择

根据维生素B1的性质，优化流动相配比，选择0.05mol/L醋酸钠溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5为流动相，标准品色谱图1所示。

 

2.2线性关系考察

精确称取0.0500g的维生素B1标准品，用蒸馏水溶解并定容至100ml，放于冰箱中备用。测定时将储备液稀释至浓度为10.0ug/ml，过0.45um滤膜，配制标准系列浓度为0.01、0.05、0.10、0.20、1.0、10.0ug/ml。

结果表明在0.01到10.0ug/ml浓度范围内，以进样浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程Y=7.46×106X，r=0.9998，维生素B1有良好的线性关系。

2.3重现性考察

精密吸取浓度为0.05ug/ml标准品溶液10uL，进GX液相色谱仪测定，重复进样5次，记录峰面积，计算峰面积标准偏差，得维生素B1的RSD=1.8%。

3结论

本方法具有方便、准确、灵敏度高、精密度好等优点，且线性范围宽,重现性好，可以满足日常分析需要。

2004-07-26