小鼠白细胞介素-2（IL-2）ELISA检测试剂盒操作步骤说明

小鼠白细胞介素-2（IL-2）ELISA检测试剂盒操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

小鼠白细胞介素-2（IL-2）ELISA检测试剂盒试剂的准备

1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
800pg/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400pg/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200pg/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100pg/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50pg/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25pg/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0pg/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。