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为了保证所测得的ELISA结果准确，操作在实验的过程中需要对常见问题及复杂步骤做足功课，掌握了各个步骤的隐患之后，再去实验就会容易的多。其中，上海沪鼎生物特别说明这些ELISA步骤等您ZD优化：
一、ELISA试剂盒加样的优化
在这一过程中，一般情况下有三次加样，它们分别是加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血块收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。
加样示意图：
二、ELISA试剂盒包被条件的优化
1.包被液的选择：一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
2.包被浓度的选择：包被的Z适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的Z适包被浓度需要通过实验来确定。
3.包被温度的选择：通常是4-8度条件下放置一个晚上或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。
4.包被抗原的选择：可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质，比如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。
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