大鼠（ Rat ）一氧化氮（NO）ELISA 检测试剂盒使用说明书

深度解析

大鼠（Rat）一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒使用说明书
[本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断]
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预
先包被一氧化氮（NO）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、
HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB
在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的
黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮（NO）呈正相关。用酶标仪
在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞
刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟
取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于
-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解
后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，Z终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无
标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无
样本稀释液6mL3mL无
检测抗体-HRP10mL5mL无
20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释
底物A6mL3mL无
底物B6mL3mL无
终止液6mL3mL无
封板膜2张2张无
说明书1份1份无
自封袋1个1个无
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、2.5、5、10、20、40μmol/L
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓
冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽
孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封
袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不
加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶
（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去
洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的
OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应
OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样
本浓度值。
试剂盒性能
1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于
0.9900。
2.灵敏度：Zdi检测浓度小于0.1μmol/L。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月
免责声明
1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所
产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者
承担。

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2004-11-27