人可溶性淀粉样前体蛋白（超敏）检测试剂盒（日本IBL原装进口，货号:27734）日本IBLZGdu家dai理商“深圳科润达生物工程有限公司”竭诚为您服务前言介绍阿尔茨海默病（AD）首次是德国神经病理学家A.Alzheimer于1907年公布的,它被公认是导致痴呆的主要因素.原理此固相ELISA检测试剂盒运用两个高特异性抗体.加入TMB底物液后作为显色剂.显色的强度与人的可溶性淀粉样前体蛋白α（sAPPα）的量成正比.检测范围0.78-50ng/mL预期用途供研究用,不能用于诊断步骤.■此IBL检测试剂盒能用于人血清,EDTA血浆,脑脊液,细胞培养基上清液的sAPP的定量检测.■建议血清样本，EDTA-血浆样本稀释4-8倍.■脑脊液样品超过4倍.■如果细胞培养上清中含有血清如FCS，可能会有交叉反应，建议设置一个阴性介质质控试剂盒组成1预包被板:抗人-sAPPα（2B3）小鼠IgG单克隆抗体,亲和纯化96T2浓缩酶标抗体（30X）HRP标记的抗人APP（R101A4）小鼠IgG单抗,Fab’亲和纯化0.4mLx13标准品:重组人sAPPα蛋白0.5mLx24EIA缓冲液30mLx15酶联物稀释液1%的BSA,0.05%吐温20的PBS12mLx16底物液:TMB溶液15mLx17终止液:1NH2SO412mLx18浓缩洗涤液:40×0.05%吐温20的磷酸缓冲液50mLx1操作说明1所需实验器材（但本试剂盒没有提供）酶标仪（450nm）微量移液管及枪头量筒及烧杯去离子水冰箱（4°C）坐标纸（log/log）吸水纸试管洗瓶用于“2浓缩酶标抗体”及“6底物液:TMB溶液”的一次性试管2准备1）洗涤液的准备“8浓缩洗涤液”是一种40倍的浓缩液.放置至室温后,把50mL的浓缩液溶于1950mL的去离子水中制成稀释洗涤液,置于冰箱中能保存2周.2）酶联物的准备“2浓缩酶标抗体”是一种30倍浓缩物,使用一次的试管用“5酶联物稀释液”稀释“2浓缩酶标抗体”制成所需酶联物.（按1:30稀释）举例：如果你使用的是8孔的，那我们需要配置800ul的标记抗体，30ul的“2浓缩酶标抗体”和870ul的“5酶联物稀释液”混合，每孔加100ul3）标准品的准备取0.5mL的去离子水稀释瓶装的”3标准品”,混匀制成100ng/mL的人sAPPα标准品4）标准品的稀释准备8支试管用于标准品稀释并编号.各加230μL”4EIA缓冲液”于各试管中.取230μL标准品溶液于试管1,混匀.然后再从试管1中取230μL溶液放到试管2中,按此规律,如下图如示配制系列标准品.第8支试管为0ng/mL作为零标准品.5）样本的稀释样本必需用试剂盒提供的”4EIA缓冲液”稀释.如果样本中的sAPPα浓度范围不清楚,建议预配制几种不同浓度来确定合适的检测浓度.检测步骤将所有的试剂平衡至温室（大约30分钟）,使用前混匀.确保试剂无质量问题.在检测样本的同时要准备标准曲线.1设试剂空白对照.加100μL“4EIA缓冲液”于微孔中.2各加100μL样本空白（试管8）,系列标准品（试管1-7）,样本于相应的各孔中.3在盖板后在4°C孵育过夜4用洗涤液洗板.然后在加入洗涤缓冲液,无需盖板放置15-30秒左右,再完全移除洗涤缓冲液.此步骤需重复至少7次.Z后在吸水纸上轻扣去除残留液滴.如有用自动洗板机,在洗板机上洗板4次后,上述的人工洗涤步骤仍需重复3次5各加100μL酶联物溶液于各孔中.6盖板后在4°C下孵育30分钟7按步骤4洗板9次.8加所需量的“6底物液:TMB溶液”至一次性的试管中.再各取100μL底物液于相应各孔中.注意一次性试管内的多余底物液切勿倒回瓶中,避免交叉感染.9避光在室温下孵育包被板30分钟.加入底物液后,孔内的液体会变成蓝色.10各加100μL“7终止液”至各孔中,轻扣板条混匀.加入终止液后孔内的液体会变成黄色.11去除板底的污垢或液滴,确保无气泡形成,在加入终止液后30分钟内用酶标仪于450nm处测其吸光度值.特别注意1样本收集后应立即检测.如是冷冻储存的样本,则需解冻,避免反复冻融.2样本必需用“4EIA缓冲液”稀释.3建议样本和各标准品做双份检测4样本应保持在中性PH范围内.因为有机溶剂的污染会影响检测结果5只可以用试剂盒提供的洗涤缓冲液用于洗板,不充足的洗板可能会导致错误的结果.6在吸水纸上轻扣板去除留液滴.切勿用吸水纸刮擦微孔.7“6底物液”需避光保存,避免让其与金属接触.8加“7终止液”后,30分钟内必需读数.结果分析与计算所有的测量的吸光度值（包括标准品,未知检测样本）都需减去空白对照的吸光度值.在双对数坐标纸上,以标准品浓度作为横坐标,以相对应的吸光度作为纵坐标,通过光滑的点绘制标准曲线.检测样品的浓度可直接在标准曲线读取.以上的标准曲线仅供示例演示,不能用于样本结果的读取.每次检测都必需建立其标准曲线.本译文仅供参考，详情请以原文为准。ZGdu家总代理：深圳市科润达生物工程有限公司公司地址：深圳市南山区蛇口沿山路10号6层。邮编：518067联系电话：0755-26814430（8线）传真：+8675526814431免费订货电话：800-8306296。技术咨询：座机，0755-26680196；手机，15711973608；E-mail，kerunda@szonline.net。网址www.kerunda.com.cn欢迎索取详细资料，在线Email：kerunda_tech@163.com
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2004-11-24
