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1.将随机提供的减压阀装在二氧化碳钢瓶上，接头处不得有漏气现象，（国产培养箱）暂不打开钢瓶。将减压阀输出接头用胶管（可用血压计上用的外径φ8，内径φ4的橡胶管代用）与CO2箱背后上方的CO2进气管接头接通相连，用压紧圈压紧，以防漏气。
2.用酒精将CO2箱工作室内擦净，在箱体后背打开紫外线灯电源开关，消毒1-2小时。
3.用加水管连接水龙头和箱体左上侧加水口。水套式CO2箱依此操作！
4.接通电源，电源开关置“1”，绿色指示灯亮。
a.水套式CO2箱必须先进行加水操作，步骤如下所述：
打开水龙头，缓慢给水箱加水，随水位逐渐升高，当低水位指示灯灭后（岛韩实验室仪器），此时再等待3-5秒后停止加水，此时水位在低、高水位之间，水位灯均应不亮，设备可投入运行。在未加水至高于低水位时，低水位指示灯亮并有蜂鸣报警声。如进水过多，高水位指示灯亮后，水将从箱体背后溢水口溢出，故当高水位指示灯亮时，把左下侧的放水口橡皮管拉出后拔出放水塞放水（注意：放水橡皮管应向外拉直约300mm左右）。直至高水位指示灯灭后2-3秒，再把放水塞头塞紧。低水位报警时，应及时加水，否则温度控制器停止加热。
b.将温度设定值调到需要的温度（例如37℃），（实验室培养箱）加热指示灯（绿）应亮，表示正在加热。（注：环境温度超出25℃，可用空调降低环境温度。）
c.将二氧化碳控制开关置于“0”。（关闭电磁阀，因为在未通二氧化碳培养时电磁阀长时间通电会发热，影响电磁阀寿命。）
d.待温度达到设定值后。将二氧化碳钢瓶开启，（开启前，减压阀应尽量拧松，防止减压阀输出压力过高导致输气橡皮管暴裂！）减压阀上进气压力表指示钢瓶内二氧化碳压力，缓慢地顺时针拧减压阀旋扭。使减压阀输出压力指示为0.05Mpa，指针处于刻度线中间。此时用拨盘设定二氧化碳浓度（出厂时调整为5%），开启二氧化碳控制开关前要关闭空气流量计和二氧化碳流量计，二氧化碳控制器显示“1”，此时即有二氧化碳进入内室。随着浓度升高，二氧化碳控制器显示出二氧化碳浓度值，到设定值时，设备自动切换到空气及二氧化碳补气状态。此时需调整空气流量计浮子应指示在760ml/min（出厂时已调好），二氧化碳流量计浮子应指示在40ml/min（出厂时已调好）；若浮子偏离上述数值时，可调节流量计旋钮到760ml/min（空气）及40ml/min（二氧化碳）准确为止。（二氧化碳培养箱）（在开、关箱门后，短时间内空气流量计无流量，CO2流量计流量也小于40ml/min这是正常现象）
e.出厂时一般调整为5%±0.3%二氧化碳浓度，已能满足广大用户的要求。
f.当温度达到设定值，波动±0.5℃以内，二氧化碳浓度也达到要求后,即可进行细胞培养。放入水盘，使湿度符合要求。
g.在首次使用本机或长期不用后使用本机，均应按上述要求操作，并且在正式培养前应作箱内污染检查。
5.关机
培养结束后，开箱门取出培养皿，将未培养皿重新放入（注意观察水盘中的蒸馏水是否需补充）。若停止培养，则应先将CO2钢瓶关闭，再将空气流量计和二氧化碳流量计关闭，CO2进气开关置“0”位置，Z后关闭总电源。若长期不使用，则应取出水盘，擦干工作室，在CO2进气开关关闭状态下，使CO2箱在37℃条件下开机2小时，烘干工作室，再切断总电源。
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