仪器资讯

蛋白酶YZ剂的选择 应用 使用 方法 说明 上海索宝生物科技有限公司 为你服务 罗氏蛋白酶YZ剂&磷酸酶YZ剂

深度解析

上海索宝生物科技有限公司为你服务

电话:021-64855665传真:021-54261506

罗氏蛋白酶YZ剂&磷酸酶YZ剂

cOmplete是多种蛋白酶YZ剂的混合片剂:为水溶性片剂;同时持续YZ丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等在内的多种蛋白酶;可用于所有的组织及细胞,如动物、植物、酵母、细菌或真菌。

PhosSTOP保护蛋白质不发生去磷酸化反应;可以YZ多种磷酸(酯)酶;适用于在细胞裂解过程中保护蛋白质,并且可以适用于多种不同来源的样品(哺乳动物,植物,酵母);可以结合cOmpleteLysisKits和cOmpleteProteaseInhibitorCocktailTablets一起使用;这种YZ剂药片可用于缓冲(固定术)。目录号产品描述规格目录价目录性价比4906845001PhosStop,10tablets,EASYpack10tablets(eachtabletfor10ml)¥1,195¥11.95/ml4906837001PhosStop,20tablets,EASYpack20tablets(eachtabletfor10ml)¥2,249¥11.25/ml11836153001CompleteMini,25tablets25tablets(for10mleach)¥1,854¥7.416/ml11836170001CompleteMini,EDTA-free,25tablets25tablets(for10mleach)¥1,854¥7.417/ml11697498001Complete,20tablets20tablets(for50mleach)¥3,087¥3.087/ml11836145001Complete,3x20tablets3x20tablets(for50mleach)¥8,740¥2.913/ml11873580001Complete,EDTA-free,20tablet20tablets(for50mleach)¥3,087¥3.087/ml4693116001cOmplete,20tablets,EASYpack20tablets(infoilblistersfor50mleach)¥3,087¥3.087/ml4693132001cOmplete,EDTA-free,20tablets,EASYpack20tablets(infoilblistersfor50mleach)¥3,087¥3.087/ml4693124001cOmplete,Mini,30tablets,EASYpack30tablets(infoilblistersfor10mleach)¥2,240¥7.466/ml4693159001cOmplete,Mini,EDTA-free,30tablets,EASYpack30tablets(infoilblistersfor10mleach)¥2,240¥7.467/ml

更多的产品信息,请登陆http://www.roche-applied-science.com/proteaseinhibitor

当细胞破碎的时候,蛋白水解酶就会被释放出来或被激活,使电泳结果复杂化,影响Z终结果分析。为了避免这些情况的出现,建议在样品制备时尽可能在低温下进行。此外,许多蛋白酶在pH9以上就失活了,因此Tris碱,碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能YZ蛋白水解。

但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性,此时应当使用蛋白酶YZ剂。因此对于我们想要研究的蛋白来说,选择性和有效的YZ这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。

蛋白酶YZ剂与蛋白酶一样,都是纷繁复杂的,通常使用许多化学物质作为蛋白酶YZ剂,如PMSF和leupeptin。而且由于一种蛋白酶YZ剂只对某一类蛋白酶起作用,因此通常建议复合使用蛋白酶YZ剂,如广谱蛋白酶YZ剂“鸡尾酒”,见下表(来自《蛋白质电泳实验技术》)。

蛋白酶YZ剂有效YZ的酶PMSF(Pheylmethylsulfonylfluoride)是很常见的YZ剂,使用浓度为1mmol/L不可逆YZ丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。AEBSF丝氨酸YZ剂,使用浓度为4mmol/LAEBSF的YZ活性与PMSF相近,但它更易溶于水而且毒性低EDTA,EGTA,使用浓度为1mmol/L通过鳌合蛋白酶维持活性所必需的金属离子来YZ金属蛋白酶。多肽蛋白酶YZ剂,使用浓度为2-20ug/ml亮肽素(Leupeptin)能YZ多种丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶;抑肽素(pepstatin)YZ天冬氨酸蛋白酶;抑肽酶(aprotinin)能YZ许多丝氨酸蛋白酶;苯丁YZ剂(bestatin)能YZ氨基酸多肽酶TLCk,TPCK,使用浓度为0.1-0.5mmol/L不可逆的YZ丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶苄脒(Benzamidine)使用浓度为1-3mmol/LYZ丝氨酸蛋白酶

其实重要的是这种片剂操作方便:只要将一片completeTM加进缓冲液,便可YZ多种不同的蛋白酶,有效地保护目的蛋白,效果明显,免除了称量个别YZ剂的麻烦。而且completeLysis1个Kit20次反应,定价为2167(CompleteLysis,bacterialII,其它类型价格差不多),高品质,价格也不高,一举两得,何乐而不为呢?

另外MERCK在YZ剂生产提供方面也实力雄厚,旗下的各有一千多种不同用途的YZ剂用于信号转导、细胞凋亡、蛋白质组、细胞分化、神经生物等诸多领域。其中也包含了分别适用于细菌、植物、酵母、哺乳动物细胞、重组蛋白、His融合蛋白等不同目的的蛋白酶YZ剂混合物,特异性YZ丝氨酸蛋白酶或半胱氨酸蛋白酶活性的YZ剂混合物、碱性磷酸酶YZ剂混合物、酸性及碱性蛋白酶YZ剂混合物等等。

比如用于广谱蛋白YZ的ProteaseInhibitorCocktailSetI是五种蛋白酶YZ的混合物,广泛YZ多种不同蛋白酶及酯酶的活力,以冻干粉形式提供(每管以1ml水重溶,即可得1ml的100储液),方便保存。其它有针对性的蛋白酶YZ剂还有ProteaseinhibitorcocktailsetII(细菌专用)、ProteaseinhibitorcocktailsetIII,EDTA-free(哺乳动物细胞和组织专用)、proteaseinhibitorcocktailsetIV(酵母及真菌专用)、ProteaseinhibitorcocktailsetV,EDTA-free(哺乳动物细胞和组织专用广谱丝氨酸、半胱氨酸蛋白酶YZ剂)、ProteaseinhibitorcocktailsetVI(植物专用)和ProteaseinhibitorcocktailsetVII(His融合蛋白纯化专用)。种类繁多,合适于有不同要求的实验人员。

除此之外,GBiosciences的ProteCEASEProteaseInhibitorCocktails包含了各种经过浓度优化后的蛋白酶YZ剂,具有良好的YZ广泛物种蛋白纯化中的蛋白酶活性的作用。ProteCEASE已经发展成为大规模制备型,具有50ml和100ml的裂解缓冲液中使用的两种规格。ProteCEASE分含有EDTA型,用于YZ金属蛋白酶(metalloprotease);和不含有EDTA型,用于维持依赖于二价阳离子的蛋白的活性。EDTA-freeProteCEASE型不会影响使用固相亲和层析的蛋白纯化,这种方便的形式具有强烈的蛋白YZ作用。

AppliChemGmbH的AEBSFhydrochlorideBioChemica通过磺酰化蛋白酶活性ZX的一个基团,不可逆地YZ凝血酶thrombin和其他一些丝氨酸蛋白酶(chymotrypsin,kallikrein,plasmin,proteinaseK,trypsin)。这种试剂是PMSF和DFP的低毒替代品,具有较高的水溶性,溶液状态的pH为酸性,所以在这种pH下,稳定性较高。

除了蛋白酶YZ剂以外,在许多研究过程中,尤其是一些制药公司和研究院在研究药理学机制的时候,需要了解蛋白磷酸化途径,因此一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态,所以蛋白抽提的另一个重要保护过程就是对磷酸化状态的有效保护。

磷酸化的蛋白可以被非特异性的磷酸酶(例如:碱性磷酸酶),特异性的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或双重特异性磷酸酶去磷酸化。针对这种情况罗氏也推出了一种PhosSTOP磷酸酶YZ剂混合片(可以与complete蛋白酶YZ剂兼容),这是一种即用型的片剂,其中的一些磷酸酶YZ剂只需要纳摩尔级的量。无需花费漫长的时间寻找合适的磷酸酶,也不必繁琐的称量和混合。PhosSTOP可同时持续YZ包括酸性和碱性磷酸酶,及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1,PP2A,PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶在内的多种磷酸酶。

而且PhosSTOP可应用于多种细胞提取物中磷酸酶的YZ作用,包括对酸性和碱性磷酸酶,丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1,PP2A,PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶的YZ作用。除了有效YZ目的蛋白的去磷酸化,PhosSTOP也不会影响后继的蛋白检测(例如:westernblot)或是蛋白浓度检测(例如:BCA或是Bradford)。

当然提到磷酸酶YZ剂或者蛋白酶YZ剂,一个业内公认的做得相对不错的就是默克了,它的磷酸酶YZ剂混合物是以DMSO贮存液的形式,摆脱繁琐的操作步骤,节约成本和时间,在效果方法能有效YZ剂蛋白样本中的各种磷酸酶(酸性/碱性磷酸酶、丝/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸磷酸等),配方完全公开,便于研究人员灵活应用。

旗下产品包括:可YZ酸性磷酸酶、碱性磷酸酶及酪氨酸磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetII,可YZ丝/苏氨酸磷酸酶及酪氨酸磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetIII,以及可YZ丝/苏氨酸磷酸酶及碱性磷酸酶的PhosphataseInhibitorCocktailSetIV。

总而言之,在实验中适当的选择一些经过严格的质量监控的产品,想来相比较于家制的鸡尾酒而言具有更好的使用重复性,和有效性,让我们在下游应用中得到更洁净和清晰的结果。

但是这样配置溶液进行处理,有时也是颇为麻烦,而且效果可能并不好,目前有一些厂家试剂在简便操作,和YZ效果方面有不俗的表现,可以考虑在实验中选用,节约时间和便于结果分析。

比如,罗氏的Complete蛋白酶YZ剂混合片也许就能满足这种需要,这种试剂能YZ很多种不同的蛋白酶,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等,而且可应用于差不多所有的组织或细胞提物,包括来自动物、植物、酵母、细菌和直菌的样品。

除此之外,Complete蛋白酶YZ剂混合片所有成份都稳定和无毒,能提供安全和可靠的保护,这种混和片有不含EDTA的配方,这样就更不会影响依赖金属的蛋白的活性,并可确保有效进行一些纯化工作(如应用Poly-His)标记的蛋白)。


仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

相关热词:

等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜



2004-11-06
您可能感兴趣的产品评测