抗体的测定一般不使用竞争法。当抗原中杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时，可采用这种模式测定抗体。如乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的测定，由于e抗原较核心抗原仅多29个氨基酸，e抗原很容易转变为核心抗原，因此，HBcAb和HBeAb的测定均采用竞争法。但其测定具体模式有区别。抗原的固相化既可以直接进行，亦可以通过相应特异抗体而间接固相化。下面就HBcAb和HBeAbELISA测定具体操作步骤分述如下。1．HBcAb的竞争法测定（1）先将HBcAg在碳酸盐缓冲液中4~C过夜包被，形成固相抗原，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。（2）同时加入待测样本和酶标的特异抗体，温育一定时间后洗板；此步中，待测样本的抗体将与酶标抗体竞争与固相上特异抗原结合。（3）加入酶底物，温育显色测定，显色的强弱与待测样本中的相应抗体的含量成反比（图2-8）2.HBeAb的竞争法测定（1）先将HBeAb在碳酸盐缓冲液中4℃过夜包被，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗原后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质；（2）同时加入待测样本和中和抗原HBeAg，温育一定时间后洗板；此步中，待测样本的抗体将与固相抗体竞争结合与中和抗原HBeAg，待测样本中HBeAb浓度越高，则与固相HBeAb结合的HBeAg越少，反之亦然；（3）加入酶标的特异抗体，温育一定时间后洗板；此步中，酶标抗体将与结合于固相抗体上的特异抗原结合；（4）加入酶底物，温育显色测定，显色的强弱与待测样本中的相应抗体的含量成反比（图2-9）HBeAb之所以要采用此种模式测定，主要是HBeAg的不稳定所致，如在固相直接包被HBeAg，则会因为HBeAg向HBcAg的易转变性，而导致测定误差。抗体的竞争法测定不同于只有单个抗原决定簇的小分子抗原的竞争法测定，其测定的可靠性，在很大程度上受竞争抗体的特异性和亲和力大小的影响，竞争抗体与待测抗体在结合的特异性及亲和力越接近一致，则测定的可靠性越强，但竞争用抗体均为相应抗原免疫动物所得，与机体感染病毒后所产生的抗体肯定会有所差异，因而，在目前HBeAb和HBcAb的临床检测中，常有难以解释的测定结果出现，这与其在方法学上的固有缺陷是分不开的。
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2004-11-06
