台盼蓝(TrypanBlue,也称Directblue14):一种死细胞染色用色素
化学名:
3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonicacid),tetrasodiumsalt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸),四钠盐
分子式:C34H24N6Na4O14S4
分子量:960.81
CASNumber:72-57-1
外观:黑褐色结晶粉末
摩尔吸光度:>69,000(在606nm附近)
染色原理:
细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说,台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性,通常认为细胞膜丧失完整性,即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试(dyeexclusion),ErythrosinB(红色)、negrosine、eosinY、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞,并可使用细胞计数器进行计数。
溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深蓝色。
台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况,用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟,在显微镜下观察即可。
应用于细胞凋亡:
如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的,此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。
储存条件:常温保存
注意事项:
1.台盼蓝对人体有毒
2.台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
3.台盼蓝染色法对于悬浮细胞来说,还比较方便,对贴壁细胞来说,较为繁琐。因为要消化,有时,96孔板不一定能消化干净。而且,该法是测定细胞浓度的方法,与细胞悬液的体积有关,加入的胰蛋白酶或1640要计入终体积。可以说,该法相对准确,可能有一些人为因素的干扰。
保存条件
4℃、无菌、密封保存,一年有效。
使用说明
1.收集细胞
贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化,吹打分散成单个细胞悬液;
悬浮细胞直接吹打瓶底使成细胞悬液;
收集细胞悬液,用细胞稀释液适当稀释;或离心弃上清,估测细胞数量,向沉淀中适量加入细胞稀释液,吹打重悬细胞。
2.台盼蓝染色
吸取100微升细胞悬液到EP管内,加入台盼蓝染色液100微升,轻轻吹打混匀,3-5分钟(染色时间不宜过长)后滴板计数。
3.细胞存活率分析
吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液,滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。
细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数X1**%。
注意事项
本产品所提供的两种溶液均经过滤CJ,取用时Z好在超净台内进行,以免微生物污染。
染色试剂具有潜在的致癌性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
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