兔胰岛素（INS）elisa试剂盒操作步骤

兔胰岛素(INS)elisa试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

20 mIU/L  5 号标准品  150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

10 mIU/L  4 号标准品  150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

5 mIU/L  3 号标准品  150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.5 mIU/L  2 号标准品  150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

1.25 mIU/L  1 号标准品  150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl， 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品Z终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.  温育：操作同 3。

8.  洗涤：操作同 5。

9.  显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。