HEPES缓冲液的配制和使用方法

在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。

HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌口秦乙磺酸，分子式:C8H18N2O4S。

HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。

关于HEPES缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：

一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制

119.15gHEPES溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)

HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液调节pH值，Z后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5MNaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有两种：

(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤CJ。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH调pH至7.2，滤过CJ后使用。此时HEPES的使用浓度为10mmol/L。

(2)亦可配成100x贮存液(lmol/L)，使用前取99ml培养液加入lml贮存液，Z终应用浓度仍为10mmol/L。lmol/L(100x)HEPES贮存液配制方法：取23.8gHEPES溶于90ml双蒸水中，用lNNaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤CJ，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，大家根据实际情况正确灵活配制就OK了。