elisa试剂盒实验内标法的操作

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elisa试剂盒实验内标法的操作：
①将已知量的内标样加入标准样品，制成混合标样，并配制一系列的已知浓度的工作标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。
②注入色谱柱，以（标样峰面积/内标样峰面积）为响应值。
③根据响应值与工作标样浓度之间存在的线性关系，即W=f×A，制成标准曲线。
④将已知量的内标样加入未知样品，注入色谱柱，得到欲测组分的响应值。
⑤根据已知的系数f，即可求出欲测组分的浓度。
注意事项
1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的Z适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值Zda而蛋白量Z少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
（3）酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
（4）酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
elisa试剂盒大鼠E选择素(E-Sel)ELISA试剂盒，英文名：E-SelELISAKit
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大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒，英文名：CXCR3ELISAKit
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大鼠CD68分子(CD68)ELISA试剂盒，英文名：CD68ELISAKit
大鼠CD63分子(CD63)ELISA试剂盒，英文名：CD63ELISAKit
大鼠CD4分子(CD4)ELISA试剂盒，英文名：CD4ELISAKit
大鼠CD45分子(CD45)ELISA试剂盒，英文名：CD45ELISAKit
大鼠CD44分子(CD44)ELISA试剂盒，英文名：CD44ELISAKit
大鼠CD3分子(CD3)ELISA试剂盒，英文名：CD3ELISAKit
大鼠CD34分子(CD34)ELISA试剂盒，英文名：CD34ELISAKitelisa试剂盒

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2004-09-26