1.青海发光杆菌醋酸菌斜面培养基:葡萄糖1克,酵母膏1克,碳酸钙1克,琼脂2.5克,水100毫升
2.斜面培养斜面制作:培养基按配方调配好(碳酸钙先不加入),分装试管,灭菌备用。碳酸钙按比例分装、灭菌。摆斜面前将培养基和碳酸钙混合,用手搓均匀,然后摆斜面,备用
3.AcetobacterMedium(醋酸菌培养基)
Glucose(葡萄糖)100g
Yeasstextract(酵母膏)10g
CaCO320gAgar(琼脂)15g
Distilledwater(蒸馏水)1000ml
Adjust(调)pHto6.8
适用范围:恶臭醋酸杆菌混浊变种
3.1斜面培养基
葡萄糖8g,酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5,分装试管。0.IMPa灭菌20min。95%酒精(食用级)40mL。摆斜面,
3.2液体增殖培养基
葡萄糖10g酵母粉10gpH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL0.1MPa灭菌20min。
3.3醋酸菌种的制备
青海发光杆菌扩大培养过程:安瓿管,液体试管1.液体试管2,100mL三角瓶,500mL三角瓶,1000mL三角瓶,种子罐。
3.3.1安瓿管开启:酒精棉球擦抹三次,用重器撞击,打开,注入0.5mL无菌水,将菌球溶解,全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内,30℃培养72h,每2h摇动次
3.3.2菌体生长:培养基变混浊后,颜色变浅,对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液,30℃培养48h,每2h摇动次。
3.3.3三角瓶三级扩培,三角瓶中培养基的装量为50%,每级按种量在10%左右,在转换振荡器上恒温培养,培养温度均为30℃,时间依次缩短为36、36、24h,
3.3.4种子罐培养基同前配料后种子罐夹套加热灭菌100℃保持15min,冷却后,先加入4%食用酒精,无菌操作接入菌种。接种量为10%~12%,温度保持在30℃±1℃,通无菌空气,菌体生长时间为24~36h.视菌体生长情况及镜检结果而定
3.3.5青海发光杆菌每次接种前,先将菌种进行外观观察。有异样情况者,作涂片、染色、镜检观察,菌体生长不正常或染菌的三角瓶不得使用。外观正常者抽检23个样品,在确保菌株纯度、无污染的情况下转入下一级菌种扩培。培养醋酸菌时,需要用含糖或酵母膏(维生素B)的培养基,在肉汤蛋白胨培养基上生长不良。大多数菌株可用六碳糖和甘油作为碳源,对甘露醇和葡萄糖酸盐很少能利用或不能利用,不分解乳糖、糊精和淀粉。醋酸菌不形成芽孢,一般为形态近于球菌的短杆菌。醋酸菌可在PH4.3以下繁殖,增殖时多在液面成膜。幼龄细胞呈G-,老龄细胞呈可变性,因而染色只用来作为鉴定时的参考因素。
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