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葡萄糖氧化酶试剂盒说明书

对比测试
葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)试剂盒说明书

分光光度法50管/48样

测定意义

GOD(EC1.1.3.4)广泛存在于动物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD催化产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存;试剂二:液体8mL×1瓶,4℃保存;试剂三:液体2mL×1支,4℃保存;

样品测定的准备

组织处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆):直接检测。

测定步骤

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

2、GOD检测工作液的配制:用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混匀,待用。3、测定前将GOD检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。4、在1mL玻璃比色皿中加入40μL样本和960μL工作液,立即混匀并计时,记录500nm下20s吸光值A1和1min20s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

GOD活力单位的计算

1、血清(浆)GOD活力的计算

单位定义:每mL血清(浆)每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=3333×ΔA

2、动物组织GOD活力的计算(1)按蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD(U/mgprot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GOD(U/g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)÷T=3333×ΔA÷WV反总:反应体系总体积,1×10-3L;ε:氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数,7.5×103L/mol/cm;

d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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2004-09-12
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