常见的厌氧培养装置

厌氧培养箱

　　厌氧菌与人类及动物的生命密切相关，随着医学及生物技术的发展，人类对厌氧菌的研究越来越广泛，由于厌氧菌的厌氧特性，其培养必须在无氧条件下进行，用厌氧培养法进行厌氧菌的培养很简便、实用，是医院、工厂、教育及科研领域培养、检验、研究厌氧菌的重要手段。

常见的厌氧培养装置

　　近年关于厌氧菌培养技术和方法获得惊人的发展，使厌氧菌的培养技术日趋完善。厌氧培养技术可分为一般厌氧技术和严格厌氧技术，一般厌氧技术又可分为厌氧袋法和厌氧罐法，严格厌氧技术是指厌氧箱法。

　　1、厌氧袋

　　国外商品名为“Bio-Bag”为一透明、不透气的塑料袋，内配有产气、催化、厌氧度指示及吸湿四个系统，可在1.5h内建立厌氧条件，并能保持一周。

　　2、厌氧罐

　　厌氧罐培养技术自1916年问世以来，大体经历了一个简便化、GX化安全化、规模化和商品化的演变过程。使厌氧罐达到无氧状态有多种方法，例如，用抽气换气法以氮或二氧化碳驱除罐内氧气。

　　3、厌氧培养箱

　　我国八十年代曾由陈聪敏教授等人开发厌氧手套箱和义乌生产的抽气换气厌氧培养装置，但终因造价较高，厌氧性能稍逊而未获得全国的推广和使用，现在国内有单位在霍尔码(forma)厌氧手套箱开发原理基础上，开发研制出小型简易的厌氧手套培养箱，立足于我国的国情，装置造价低廉，操作使用简单容易。

厌氧培养装置的原理及使用

　　1、厌氧袋的原理及使用

　　根据氢“燃烧”除氧的原理所设计的一种简易厌氧袋，不但适用于培养各种临床标本中的厌氧菌，也适合培养其他专性厌氧菌。

　　厌氧袋除氧的主要原理是：①利用氢硼化钠或氢硼化钾与水反应产生氢，氢与密封袋中的氧气在钯催化下结合成水，从而建立起无氧小环境。②厌氧袋中二氧化碳由柠檬酸生成，利用美蓝的变色反应作为厌氧度的指示剂。厌氧环境无氧指示剂呈无色，有氧则变为蓝色。

　　厌氧袋结构：

　　①塑料袋：用电热法烫制的无毒复合透明薄膜塑料袋(14*32cm)：

　　②产气系统：取直径1.0cm，长16cm左右的无毒塑料软管1根，用电热法封其一端。将NaBH₄ 0.2g和NaHCO₃ 0.2g(按袋体积500mL计算)用擦镜纸包成小包，塞入软管底部，其上塞少量脱脂棉花。再将内含5%的柠檬酸溶液1.5mL的安瓶管装入塑料管，然后加上一个有缺口的泡沫塑料小塞即成：

　　③厌氧度指示管指示系统：取直径1cm，长8cm无毒透明塑料软管1根。将内含1mL美蓝指标剂的安瓶装人软管，在其上下口都先塞入少量脱脂棉花，再加泡沫塑料软塞即成;

　　④催化剂催化系统：取市售钯粒(A型)5-10粒，经加热活化后装入带有孔的小塑料硬管内即可;

　　⑤吸湿剂包吸湿系统：取变色硅胶少许，用滤纸包成小包就可以。

　　使用时放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，使袋内在半小时内造成无气环境，如不变化表示袋内已达厌氧状态。

　　2、厌氧罐的原理及使用

　　厌氧罐，罐体为聚碳酸酯材料制成，透明度好，配有硅橡胶密封圈，以保证密封。罐内分有三个空间，可分别放置培养皿、脱氧剂和指示剂。

　　(1)罐体：常见的规格是内径为15cm，高25cm的圆筒形罐休，其内可放直径9cm培养皿10只;在盖的下方ZY，旋连着一个金属丝网盒，用于存放活化的钯粒。

　　(2)H₂和CO₂的供应：厌氧罐供氢和CO₂有内源法和外源法两种。内源法相似于厌氧袋。外源法抽气换气程序为：抽气一换气一再抽气一充N₂-CO₂充H₂。

　　(3)催化剂目前一般均用常温下即可起催化的“冷式”催化剂，如“钯粒”、“钯条”等，它是由含钯的石棉等填充料加工而成的。每次使用前，把催化剂在140-160摄氏度烘箱内烘2h活化;

　　(4)厌氧指示剂：目前常用的仍是化学法，尤其是利用美蓝，也有用刃天青作为指标剂。

　　3、厌氧培养箱的原理及使用

　　厌氧培养箱是一种在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置，可培养Z难生长的厌氧生物，又能避免以往厌氧生物在大气中的操作时接触氧而死亡的危险性嘲。

　　结构特点：该产品由培养操作室、取样室、气路及电路控制系统、熔蜡消毒器等部分组成。温控系统采用高精度数显式控温仪，能准确直观的反映箱内实际温度，加上有效的限温保护装置，安全可靠。箱内装有紫外线杀菌灯，气体经过过滤后进入箱内，可有效避免细菌污染。歧路装置可任意调节流量，能任意输入各种气体。操作室均由不锈钢板制成。其前窗采用透明耐冲压特种玻璃制成。操作使用专用手套，可靠、舒适、灵活、使用方便。操作室内配有特殊接种棒灭菌器，熔蜡消毒装置，还装有除氧催化器。

　　操作方法：操作者将手伸入操作室，关紧操作室与取样室的封闭门。打开取样室的封闭门，将培养皿放入取样室，关紧取样室封闭门。将培养皿放入操作室内培养箱，操作室与取样室间的封闭门虚掩。调温，使操作室内培养箱温度达到所需温度。充入氮气和混合气各三次以上。检察操作系统。

　　注意事项：禁止在真空状态下打开舱门、手套口压盖或进行拆卸检修。内置电源为220V、50Hz、1KW。手套应先于或同时于箱体抽真空，后于或同时于箱体停止抽真空。外接气源管件应适配、接插应密封牢靠，充气时不宜超过零压即1个大气压。

　　4、其他厌氧培养装置及厌氧培养方法

　　厌氧缸：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。

　　厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。

　　生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物(多是植物)，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。

　　焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO₃粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的自蜡封边，造成一个封闭空间。