培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有水、氮源、无机盐(包括微量元素)、碳源、生长因子(维生素、氨基酸、碱基、KJ素、色素、激素和血清等)等。下面就让小编带你了解一下培养基的配制。
培养基的配制
1.配料
配方换算→将少量水(蒸馏水,自然水)加入到容器中→根据配方对各种药品进行称取(依次加入)→将所需水量加足(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。
2.溶解
淀粉溶解:加入少量冷水调成糊状
加热溶解:加热溶解尤其是加有琼脂的培养基,琼脂的熔解温度95-97℃ ,一定要煮沸,并且为了防止烧焦,需要边加热边搅拌。
3.调PH
使用盐酸或NaOH稀释液调节培养基PH达到所要求的值。
4.过滤
使用滤纸或棉花进行过滤。(有时可以省去)
5.分装
通常往三角瓶或试管中放入培养基再灭菌使用。
(1)三角瓶
如果静置培养,那么在250ml的三角瓶置入100ml培养基,在50ml的三角瓶置入的培养基至多不能高于150ml。否则,当灭菌时,棉塞可能因培养基沸腾受到污染。如果摇瓶培养,,在250ml的三角瓶放入15-20ml培养基,并且确保良好的通气。
(2)试管分装
固体斜面培养基通常装试管的1/5高度,约为3-4ml;液体培养基通常装试管的1/4高度,约为4-5ml。
6.包扎
分装好后,先用棉塞塞上,再使用牛皮纸包裹好棉塞,避免灭菌时水份进入弄湿棉塞。
7.灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。若灭菌的时候使用过高的温度,那么会破坏营养成分,培养基的颜色会由于培养基中的糖、氨基酸变深。
8.摆斜面
灭菌后需要趁热斜着摆放斜面的试管,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。
9.贮存
在30℃下将培养基放置一天,如果没有污染,就能够使用。通常用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
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