凝胶成像系统校准规范

　　凝胶成像系统是一种采用成像装置对置于暗箱内的核酸电泳凝胶、蛋白电泳凝胶进行成像，并将采集的图像输入计算机，通过相应的分析软件，对凝胶条带作定性和半定量分析的仪器。

凝胶成像系统校准原理

　　由于样品在电泳凝胶上的迁移率不一样，以标准品或者其他替代对照品作参照，根据未知待测样品在图谱中的位置可以估测其分子量大小，即定性分析。在一定浓度范围内，灰度值(光密度)与样品的一定浓度或一定质量成线性关系，根据未知样品的灰度(光密度)，通过与已知浓度的标准品或替代对照品条带的灰度(光密度)值相比较，就可以得到未知样品的浓度或质量，即半定量分析。

凝胶成像系统计量特性

　　凝胶成像系统技术指标包括：分辨力、灰阶等级、信噪比、白光照度、照度均匀性、紫外激发源光谱辐射相对分布率。

　　1、分辨力：能一定程度上反映所校凝胶成像系统成像的图片清晰程度。

　　2、灰阶等级：能反映所校凝胶成像系统的分辨图像的明暗程度。

　　3、信噪比：可反映所校凝胶成像系统成像的图片质量。

　　4、光照度和光照度不均匀率：能反映所校凝胶成像系统白光光源的照明质量。

　　5、紫外激发源光谱辐射相对分布率：能反映所校凝胶成像系统紫外激发源的紫外激发光谱分布。凝胶成像系统紫外激发源的紫外激发光谱是特指波长200nm~400nm的近紫外光谱，又可细分为UVA(320nm~400nm)、UVB(280nm~320nm)和UVC(200nm~280nm)3个波段，其中UVC(200nm~280nm)波段的紫外线易造成DNA链的断裂和碱基的脱落，从而影响实验结果的分析，所以应将UVC(200nm~280nm)波段占整个紫外激发光谱(200nm~400nm)的比例控制在一个较低的范围内。

凝胶成像系统的校准设备

　　1、分辨力：ISO 12233分辨力测试图卡。允许使用与该图卡等效的分辨力测试图卡。

　　2、灰阶等级和信噪比：灰度级测试图卡，符合GB/T9403-1988《反射式灰度级测试图》要求。

　　3、光照度和光照度不均匀率：一级光照度计，测量范围含0.1lx~199.9klx，相对示值误差不超过±4%。

　　4、紫外激发源光谱辐射相对分布率：紫外激发源校准装置，工作范围包含200nm~400nm的光谱辐射计，波长示值误差不超过1nm，读数的有效位3位以上，探测部分的非线性误差小于1%。

　　5、配图像处理软件的计算机：由于校准过程中需要读取所拍摄图片的有效像素、灰度值等，故需要配备图像处理软件的计算机。

凝胶成像系统校准方法

　　凝胶成像系统校准规范适用于对核酸电泳凝胶、蛋白电泳凝胶进行成像的凝胶成像系统的校准，其他类型的凝胶成像系统。

　　1、分辨力

　　凝胶成像系统校准时，可使用ISO 12233分辨力测试图卡或其他等效的分辨力测试图卡，以ISO 12233分辨力测试图卡为例，因ISO 12233分辨力测试图卡中有4种画面比例，分别为1：1、4：3、3：2和16：9，故在校准过程中需要根据所校不同型号的凝胶成像系统，选取合适的画面比例，使图卡的有效高度(分辨力测试图卡粗框内侧的高度)正好占满画面，然后进行拍摄，拍摄图像输入计算机，用专用软件测定拍摄图像的有效像素。

　　2、灰阶等级和信噪比

　　凝胶成像系统校准时，先以在无光源照射条件下。拍摄得到的图像作为噪声图片;然后开启白光光源预热，待光源稳定后，将灰度级测试图卡置于样品台上，使图卡正好占满画面，进行拍摄，将拍摄得到的图像作为灰阶等级图片。将两组拍摄的图片输入计算机，使用专用软件分别读取噪声图片和灰阶等级图片的灰度值，应能分辨灰度级测试图卡上的每个灰阶等级，同时将能分辨的Zda灰度值作为洁净图片的灰度值，按信噪比公式计算信噪比。

　　3、光照度和光照度不均匀率

　　凝胶成像系统校准时，开启白光光源，预热，待光源稳定后，将光照度计探头置于样品台各点，按照布点示意图逐一测定照度，Z后取各点照度的平均值作为被校凝胶成像系统的光照度。并给公式计算光照度不均匀率。

　　4、紫外激发源光谱辐射相对分布率

　　凝胶成像系统校准时，开启紫外激发源，预热20min，分别读取200nm~280nm范围内的单波长辐射照度值和200nm~400nm范围内的单波长辐射照度值。按公式分别计算200nm~280nm和200nm~400nm区域的积分光谱辐射照度值，Z后计算光谱辐射相对分布率。