解决方案

大肠杆菌质粒DNA的提取

以下介绍一种Z常用的方法:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR扩增银染序列分析方法如下:
1接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基
237振荡培养过夜
3取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液
4加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合
5加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min
6加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),轻轻翻转混匀,置于冰浴5 min
7以10,000rpm离心20min,取上清液于另一新Ep管 湘仪H2050R台式高速冷冻离心机

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