通过台式 qNMR 测定制剂片剂中的Tadalafil

核磁共振 (NMR) 是一种极其强大的表征技术，常用于药物研究以鉴定新化合物、评估纯度以及表征和优化化学反应，无论是在线（使用流通池）、离线还是在线（用于核磁共振管反应或等分分析）。虽然不太常见，但它也已被确立为制药行业常规定量分析的有用技术。1,2,3,4 台式 NMR 已成为一种易于使用的技术，可将 NMR 光谱的使用扩展到初创企业和中小企业制药公司，并提供易于使用、紧凑且可自动化的替代方案，允许 qNMR 直接纳入质量控制实验室并供技术人员使用。

 在这方面，我们描述了使用台式 NMR 对活性药物成分进行结构确认；降解产物和/或杂质的评估，以评估该技术在测定和含量均匀性测试中的功效和性能。

 NMR 与常用方法相比具有许多优势，例如滴定、红外 (IR) 光谱、拉曼光谱和色谱法。它具有化学特异性、非靶向性、非破坏性、无需校准的固有定性，并且需要非常简单的样品制备。它不需要准备稀释系列，不消耗大量溶剂，也不需要真正的标准物质5进行分析。

 在本应用说明中，我们使用 1H NMR 评估作为参考标准购买的他达拉非的纯度（图 1a），并使用两种市售的含有Tadalafil的成分进行分析测试。这些药物以商品名 Cialis 和通用名 Apo-Tadalafil 出售。这些药物用于zhi疗良性前列腺增生6、勃起功能障碍7和肺动脉高压8。

 在此定量 NMR 分析中，对苯二甲酸二甲酯（图 1b）用作内部校准物。选择它是因为它的 1H 共振中至少有一个与目标化合物的共振不重叠，并且它的 T1 值比其他可能的 qNMR 内标短。此处提供的示例特定于制药，但 qNMR 方法是通用的，可以在纯度测定对流程至关重要的任何领域的常规分析中进行验证。

图 1：a) Tadalafil的结构，b) 对苯二甲酸二甲酯 (DMT) 的结构。 绿色和红色圆圈代表本研究中评估的质子。

实验程序：Tadalafil参比标准品纯度测定

将参考标准化合物（Tadalafil，11.78 mg）Lot#：LRAB8867 和经认证的内部校准物（对苯二甲酸二甲酯 (DMT)，2.73 mg）Lot#：BCBT9974 准确称量到小瓶中，并加入 600 μL DMSO-d6.使用涡旋混合器混合溶液直至样品和内标完全溶解。将得到的澄清溶液转移到 5 mm NMR 管中，并在确定 T1 值后获得 1H NMR 谱。8.08 ppm DMT 信号的 T1 值为 2.82 s，Tadalafil 5 .92 ppm 信号的 T1 值为 0.53 s。所有化合物均购自 Sigma-Aldrich，无需进一步纯化即可使用。

光谱是在 32 °C 下使用 Nanalysis 60PRO 台式 NMR 光谱仪在 60 MHz 质子频率（1.418 特斯拉）下获得的。使用以下采集参数进行实验：复数点数，8192；光谱宽度，24  ppm；扫描次数，32；扫描延迟，20 s；光谱中心，8.03 ppm；采集时间，5.57 秒； 90° 脉冲持续时间，15.1 μs。每个光谱都应用零填充处理，零填充点数等于65536，进行相位和基线校正，洛伦兹到高斯窗口乘法应用于FID（指数线加宽 (lb) 和高斯线加宽 (gb)分别设置为 -0.1 和 0.3 Hz）。9 光谱采集一式五份进行。

结果与讨论：Tadalafil 参考标准化合物纯度测定

使用以下等式 (1) 计算分析物 Px 的纯度：

式中 Ax 为Tadalafil在 5.92 ppm 处的信号积分值； ADMT是属于DMT的8.08ppm处信号的积分值； NDMT 和 Nx 分别对应于 DMT 和Tadalafil的自旋数； Mx 和 DMT 分别是Tadalafil和 DMT 的分子量； mx 是Tadalafil的加权质量； mDMT 和 PDMT 分别是 DMT10 的加权质量和报告的纯度。

表 1：使用对苯二甲酸二甲酯 (DMT) 作为内部校准物测定Tadalafil (X) 参考化合物的纯度。

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