水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿的测定

1、提取

10 g 样品与3 mL 盐酸羟胺溶液（0.25 g/mL）、5 mL 对甲苯磺酸溶液（0.05 mol/L）和20 mL 乙酸铵溶液（0.1 mol/L）以及60 mL 乙腈混合，10000 rpm 下均质2 min ；

将混合物在4000 rpm 下离心5 min，上清液转入分液漏斗，30 mL 乙腈重复提取残渣，上清液并入分液漏斗。

向分液漏斗加入50 mL 水、2 mL 二甘醇和25 mL 二氯甲烷，振荡，静置分层，收集下层液体。再加入25 mL 二氯甲烷重复萃取一次，合并萃取液。

将萃取液在25 oC 下减压蒸馏至近干，瓶中残渣待净化。

2、净化

a 活化： 将ProElut SCX 500 mg/3 mL (Cat.#63604) 安装在固相萃取装置上，上端连接ProElut Al-N 1 g/6 mL (Cat.#65306)，用5 mL 乙腈活化小柱，流出液弃去；

b 上样： 6 mL 乙腈分三次洗涤蒸馏瓶，洗涤液过柱，流出液弃去；

c 淋洗： 用5 mL 乙腈淋洗小柱后，弃去中性氧化铝柱，然后将SCX 柱抽干；

d 洗脱： 5 mL 乙酸乙酯+ 甲醇+ 氨水混合溶液（体积比为50/45/5）洗脱，收集洗脱液；

e 重新溶解：30 oC 下减压蒸馏至干，用1 mL 流动相定容，微孔滤膜过滤后，HPLC 分析

柱后氧化柱：35 x 4.6 mm

流动相：乙腈/ 乙酸铵溶液 (0.125 mol/L，pH 4.5) =80/20

流速：1 mL/min

进样量：20 μL

柱温：35 oC

检测器：UV 618 nm

适用于鱼、虾、蟹、甲鱼等水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿的检测。

1. 孔雀石绿；2. 无色孔雀石绿